【目的】筛选和验证口腔鳞状细胞癌（OSCC）干细胞表面标志物,为基于肿瘤干细胞（CSCs）的分子靶向治疗策略提供理论基础和实验依据。【方法】本研究通过微球体培养法富集OSCC干细胞,运用细胞免疫荧光、Western blot及裸鼠皮下成瘤实验检测微球体培养的OSCC细胞干性特征。对两种不同方式培养的OSCC细胞膜蛋白进行质谱分析,利用Swissport人类蛋白数据库搜库鉴定,并进行生物信息学分析。差异表达的膜蛋白与2组人胚胎干细胞（h ESCs）膜蛋白数据库进行比对筛选候选标志物,并对CD166和CD44作进一步的功能验证。免疫组织化学法分别检测CD166和CD44在OSCC组织标本中的表达情况。同时,流式细胞仪分选CD166high和CD166low的OSCC细胞,通过微球体形成率和裸鼠皮下成瘤能力,评价CD166作为OSCC干细胞标志物的可行性。此外,原代培养OSCC组织肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）,与癌细胞共培养,分析肿瘤微环境中CAFs对OSCC细胞的增殖、侵袭、克隆形成和CD166表达情况的影响。最后,分析CAFs中Sonic Hedgehog信号通路的激活状态;上调CAFs中Shh的表达,评价CAFs中SHH通路在OSCC干细胞干性维持中的作用。【结果】OSCC微球体高表达干细胞相关标志物,并具有高致瘤性。膜蛋白组学鉴定蛋白376个,其中预测定位在细胞膜上的差异蛋白123个。差异蛋白包含细胞粘附分子、受体、转运蛋白,其中涉及WNT、整合素、TGFb等信号通路。与2组h ESCs膜蛋白数据库比对,发现共表达差异膜蛋白18个,其中包括CD166和CD44。进一步研究发现,CD166与OSCC患者预后相关（p=0.040）,而CD44不能预测OSCC患者预后（p=0.078）。另一组复发OSCC组织免疫组化检测,发现CD166高表达与肿瘤复发相关（p=0.016）。CD166highOSCC细胞具有更高的微球体形成能力和裸鼠皮下成瘤能力。此外,CAFs可以促进OSCC细胞增殖、侵袭、克隆形成和微球体形成,并上调CD166的表达。CAFs中Sonic Hedgehog信号通路处于激活状态,上调CAFs中Shh蛋白的表达,可以增强OSCC细胞干细胞特性。【结论】相对公认的OSCC干细胞标志物CD44,我们发现CD166作为OSCC新的表面标志物可行性更强,且Sonic hedgehog信号通路在OSCC干细胞干性维持方面发挥重要作用。