胃癌相关抗原MGAgs模拟表位的筛选及鉴定

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丝状噬菌体表面呈现技术自1985年至今已逐渐成熟,通过将随机核苷酸编码的寡肽插入编码包被蛋白基因的开放读框末端,即可构建含有大量的具有不同结构和组成信息的噬菌体呈现表位文库;这一技术以其高效的可筛性、有效的放大性和基因型与表型的相连性等几大特色在蛋白质的相互作用研究中占据了重要地位,并得到广泛应用。由于可以用抗体作为筛选的配基通过噬菌体呈现的随机肽库来寻找相应的抗原或抗原表位,而且不需要预先知道抗原分子本身的结构及组成,因此近年来此项技术在诊断试剂和疫苗研制方面的应用潜力日益受到重视。 为筛选具有免疫原性的胃癌相关抗原的模拟肽表位,我们尝试用胃癌单克隆抗体MG7和MGb2筛选了构建于pⅧ上的随机九肽表位文库。通过亲和富集和免疫筛选,阳性克隆进一步采用荧光标记、点印迹和ELISA等进行了鉴定。 生物传感器技术对阳性噬菌体克隆与抗体间相互作用检测的结果提示,大部分阳性克隆的结合为特异的,但噬菌体呈现的肽与抗体间的亲和力较低。 经对其中一部分克隆进行测序分析,获得了一些保守表位的信息。其中,PLX0-2S、SAVR、XRMX、YARN等有可能成为候选的MG7单抗模拟表位的基序;VCXXDGV有可能成为候选的MGb2单抗模拟表位基序。
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