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背景UHRF2是一个具有E3泛素连接酶的多结构域核蛋白,参与细胞周期、DNA损伤修复、表观遗传学和泛素-蛋白酶体系统。我们课题组在前期研究工作中证实UHRF2参与调控HBV的转录与复制,并调节与ccc DNA结合的组蛋白H3乙酰化水平。近期的研究发现UHRF2与组蛋白H3K9ac和H3K14ac存在相互结合作用。本课题基于上述研究成果,继续对UHRF2与组蛋白乙酰化之间的调控机制进行深入探索。方法本文主要通过western blot实验验证UHRF2对H3K9ac、H3K14ac、TIP60、H2AK5ac和HDAC1的调控作用关系;免疫共沉淀(Co-IP)实验验证UHRF2与TIP60和HDAC1的相互作用关系;免疫荧光染色(IF)实验验证UHRF2与TIP60和HDAC1的细胞亚定位关系;半衰期实验验证UHRF2对TIP60半衰期的调控作用关系;体内泛素化实验验证UHRF2对TIP60的泛素化作用关系;免疫组织化学染色(IHC)实验验证UHRF2与H3K9ac、H3K14ac、TIP60和H2AK5a之间的调控关系。结果1)western blot实验证实,在正常细胞中过表达UHRF2可上调H3K9ac及H3K14ac的表达,而在肿瘤细胞中过表达UHRF2则抑制H3K9ac及H3K14ac的表达。干扰UHRF2与过表达UHRF2结果一致。2)western blot实验证实,在HEK293、LO2和Hep G2细胞中缺失UHRF2的YDG结构域或RING结构域可废除UHRF2对H3K9ac及H3K14ac的调控作用。3)Co-IP和IF实验证实,UHRF2与TIP60和HDAC1存在共同定位和相互结合作用,且UHRF2的YDG结构域、PHD结构域和RING结构域对UHRF2与TIP60的结合作用至关重要,缺失这些结构域可显著降低UHRF2与TIP60的结合作用,而对UHRF2与HDAC1的结合无显著影响。4)Western blot实验证实,在正常细胞中过表达UHRF2可上调TIP60的表达及酶活性,而在肿瘤细胞中过表达UHRF2则可抑制TIP60的表达及酶活性,对于HDAC1的表达无显著调控作用。且UHRF2对TIP60的调控作用会随着蛋白酶体抑制剂MG132的加入而被废除。5)半衰期实验证实,在正常细胞(HEK293和LO2细胞)中过表达UHRF2可延长TIP60的半衰期,而在肿瘤细胞(Hep G2细胞)中过表达UHRF2则可加速TIP60的降解速率,且UHRF2蛋白RING结构域的缺失可废除这一调控作用。6)体内泛素化实验证实,在正常细胞(HEK293和LO2细胞)中过表达UHRF2可增加TIP60的泛素化,而在肿瘤细胞(Hep G2细胞)中过表达UHRF2则可抑制TIP60的泛素化。7)Western blot实验证实,在HEK293、LO2细胞和Hep G2细胞中过表达TIP60可上调H3K9ac及H3K14ac的表达,干扰TIP60则可抑制H3K9ac及H3K14ac的表达。8)Western blot实验证实,过表达UHRF2的同时干扰TIP60,废除了UHRF2对H3K9ac及H3K14ac的调控作用;同时过表达UHRF2和TIP60则可进一步上调H3K9ac及H3K14ac的表达;当我们应用TIP60抑制剂MG149处理细胞时,无论过表达野生型UHRF2还是UHRF2各结构域突变体均无法继续对H3K9ac及H3K14ac进行调控。9)免疫组织化学实验证实,在UHRF2高表达的肝癌组织中,TIP60、H2AK5ac、H3K9ac和H3K14ac呈现低表达,而在癌旁组织中,UHRF2的高表达则伴随着TIP60、H2AK5ac、H3K9ac和H3K14ac的高表达。结论在正常细胞(HEK293和LO2细胞)中,UHRF2延长TIP60的半衰期,可上调TIP60的蛋白表达量及酶活性,从而上调H3K9ac及H3K14ac的表达量,而在肿瘤细胞(Hep G2细胞)中,UHRF2可加速TIP60的降解速率,抑制TIP60的蛋白表达量及酶活性,进而抑制H3K9ac及H3K14ac的表达。