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目的:自身免疫性甲状腺炎(AIT)是常见的内分泌疾病之一,也是育龄期妇女常见的甲状腺疾病。有大量研究表明,患有AIT的妊娠妇女与正常妊娠妇女相比流产的风险会增加2-3倍[1,2]。通过本课题组前期研究证实,AIT患者血清中ENO1Ab水平较非AIT患者显著增高,这证实了在AIT这种经典的器官自身免疫性疾病中有ENO1Ab这种非甲状腺特异性自身抗体的产生[3]。本课题组在前期也通过western-blot检测到α-烯醇化酶在多种组织如大脑、甲状腺、血管内皮、卵巢等组织中均有表达,这都为本研究提供了一定的基础。α-烯醇化酶(ENO1)是一个高度保守的胞浆糖酵解关键酶[4],在细胞能量代谢的过程中起着重要作用,同时在许多生理过程中发挥其重要的功能。ENO1在胚胎及多数成人组织中也有表达,其抗体存在于多种自身免疫性疾病、炎症性疾病等[5]。但目前,仅有个别研究报道ENO1蛋白表达与流产的关系,尚未见针对ENO1介导的自身免疫反应对流产发生影响的报道。本研究旨在探讨在母体中ENO1作为自身抗原所诱导的自身免疫反应是否增加了流产的发生,以及对引起流产的初步机制研究。研究方法:将5周龄的CBA/J雌性小鼠分为两组:实验组(E group,n=8),对照组(C group,n=8)。实验组CBA/J雌性小鼠给予ENO1重组免疫球蛋白100ug加完全弗氏佐剂皮下注射,对照组CBA/J雌性小鼠用等剂量PBS代替ENO1进行免疫。两周后用相同剂量ENO1或PBS加入等体积的不完全弗氏佐剂进行末次免疫。于末次免疫后四周将两组CBA/J雌鼠分别与10周龄CBA/J雄鼠(正常小鼠妊娠模型组)和DBA/2雄鼠(易流产小鼠模型组)进行交配合笼(2:1),合笼后检查到阴道栓记为怀孕第0天,于孕13天(G13)处死小鼠。用ELISA方法测定G13天母鼠血清和羊水ENO1Ab水平。观察并比较G13天母鼠的胚胎吸收率和胚胎植入数目。对G13天母鼠的胚胎及胎盘称重并比较其差异。检测G13天母鼠血清TT4、TSH和甲状腺球蛋白抗体(Tg Ab)的水平以评估甲状腺功能。利用Western-Blot确定在正常CBA/J雌鼠胎盘组织中ENO1蛋白的表达情况。通过ELISA法对G13天母鼠胎盘组织ENO1Ab进行测定。检测G13天母鼠血清及胎盘组织纤溶酶-抗纤溶酶复合物(PAP)的水平。免疫荧光法观察胎盘组织血管内皮生长因子(VEGF)表达情况。对G13天母鼠胎盘进行HE染色观察胎盘组织结构和形态,计算胎盘组织各区域(蛻膜区、紧密连接区、迷路区)的面积和细胞密度并比较其差异。TUNEL染色观察G13天胎盘组织凋亡情况。同样于末次免疫后四周将两组CBA/J雌鼠与10周龄CBA/J雄鼠进行交配合笼(2:1),合笼后检查到阴道栓为怀孕第0天,于生产当天(P0)处死小鼠。用ELISA法检测P0天母鼠血清及羊水ENO1Ab水平。观察并比较P0天生仔只数。结果:1.G13天及P0天母鼠血清及羊水ENO1Ab水平的测定:给予ENO1免疫后G13天和P0天母鼠血清及羊水抗ENO1自身抗体明显升高(P<0.01);2.G13天ENO1免疫组胚胎吸收率明显增加(P<0.05),而胚胎植入数目虽有所减少但无统计学差异;P0天ENO1免疫组生仔只数明显少于对照组(P<0.05);3.G13天ENO1免疫组胎盘重量明显降低(P<0.05),而胚胎重量两组间无明显差异(P>0.05);4.G13天母鼠血清TT4、TSH及Tg Ab测定:ENO1免疫组较对照组相比,G13天母鼠血清TT4、TSH以及Tg Ab水平均无明显改变(P>0.05);5.Western-Blot检测发现正常CBA/J雌鼠胎盘组织中有ENO1蛋白的表达;6.ENO1免疫后G13天母鼠胎盘组织ENO1Ab较对照组明显升高(P<0.01);7.G13天母鼠血清及胎盘组织PAP测定:ENO1免疫组母鼠血清PAP水平与对照组相比无统计学差异;但将胎盘组织匀浆后测得ENO1免疫组胎盘组织PAP测定水平明显低于对照组(P<0.05);8.G13天母鼠胎盘组织VEGF免疫荧光显示:ENO1免疫组胎盘组织中浆染的VEGF的表达明显低于对照组;9.G13天胎盘组织HE染色显示:ENO1免疫组蜕膜区面积明显低于对照组(P<0.05),而紧密连接区和迷路区面积两组间无统计学差异;ENO1免疫组蜕膜区和迷路区细胞密度较对照组相比明显降低(P<0.05),而紧密连接区细胞密度两组间无统计学差异;10.TUNEL染色:ENO1免疫组胎盘组织凋亡细胞较对照组明显增加。结论:针对ENO1介导的自身免疫反应可引起小鼠流产增加;ENO1Ab可能导致凋亡以及抑制纤溶系统活性而引起胎盘组织功能受损。