背景:布鲁菌病(Brucellosis简称布病)是由布鲁杆菌(简称布菌)引起的人畜共患传染病,能够引起患者多器官系统损伤进而严重降低了患者的生活质量,故而准确诊断布病和治疗尤为重要。我国现行的布病检测主要以血清学为主,病原学的菌培养作为金标准,但这些传统的诊断方式在布病诊断中容易造成延误,甚至误诊。同时,布病治疗效果也只能通过血清学的抗体水平结合临床症状进行评价,更无法获知患者胞内携菌情况。因此,布病的防治和诊断,以及治疗效果的评价,都迫切需要一种更准确,安全,易操作的病原学诊断方法。Foxp3+调节性T细胞(Treg)是一种对于人体免疫稳态必不可少的T细胞亚型,是诱发免疫耐受/抑制的重要成因。有报道称机体感染病原菌后,Tregs的调控作用会导致病原体不能及时被清除而形成慢性感染。布病极易转为慢性感染,而且易复发,难治愈,但迄今未见我国关于布病感染或治疗过程中机体免疫的临床调查报告,更不清楚Treg介导的免疫耐受在此过程中发挥的作用。目的:1.调查布病患者外周血Treg含量的变化,初步研究Treg介导的免疫耐受与布病慢性感染且难治愈的相关性,最终为个体化免疫治疗方案提供临床数据参考。2.建立一种准确,安全,易操作的布菌抗原检测方法,以期为临床的布病诊断、治疗效果评价和预后判断提供新的参考标准,指导布病的临床治疗。施1、研究对象 黑龙江农垦总医院布病患者。2、实验材料 抗人CD3、CD4和Foxp3流式抗体;实验室保存的布菌外膜蛋白单抗;293A细胞株、THP-1细胞株;异硫氰酸荧光素(FITC)。3、实验方法 流式细胞术,ELISA,细胞免疫荧光,FITC标记抗体,THP-1细胞模拟布菌感染。结果:1、急性期布病患者外周血中的Treg细胞含量与感染持续时间密切相关,经治疗可恢复为健康对照组水平,并且不同的治疗方案对于治疗效果并无明显的改善。2、慢性期布病患者外周血中的Treg细胞含量治疗前后始终维持高位水平。3、筛选了 1个能够与布菌疫苗株反应的单抗5H3,并成功标记荧光素FITC(5H3-FITC),可用于流式细胞技术和免疫荧光技术;抗体活性鉴定结果,上述两种方法均对293FT细胞真核表达的布菌抗原检测灵敏度高。4、利用5H3-FITC检测含菌的THP-1细胞,实验结果显示上述两种方法均能检出细胞内的布菌。结论:1临床调查发现,布病患者外周血中Foxp3+Treg含量有升高趋势,并在慢性期维持高位,推测可能发生了 Treg介导的机体免疫耐受,导致布病难治愈,易复发。2建立了一种利用荧光标记布菌外膜蛋白单抗检测布菌病原体的方法。