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目的：构建梅毒螺旋体(Treponema palludim, Tp)重组蛋白TpF1的原核表达载体，在大肠杆菌中进行诱导表达，纯化表达产物并进行免疫原性和免疫反应性分析，为进一步探索重组蛋白TpF1在梅毒血清学诊断中的应用及其生物学功能提供一定的实验依据。方法：从GenBank获取TpF1基因序列，设计引物，以Tp Nichols标准株基因组DNA为模板，PCR扩增其全基因片段；构建pET28a-TpF1原核表达载体，酶切、测序鉴定后，转化至表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中，IPTG诱导重组蛋白TpF1的表达，SDS-PAGE和WesternBlot对表达产物进行分析、鉴定；用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白，BCA法测定蛋白浓度；收集重组蛋白免疫兔血清、Tp Nichols标准株和Tp临床分离株（nhgz01和nhgz02）感染兔血清，WesternBlot检测重组蛋白TpF1的免疫原性和免疫反应性；建立TpF1-ELISA方法，分别检测各期梅毒患者血清、交叉血清及阴性血清，初步评价重组蛋白TpF1在梅毒血清学诊断中的应用价值。结果：通过PCR扩增获得约500bp大小目的片段；pET28a-TpF1重组质粒经双酶切鉴定和基因测序分析证实插入片段为TpF1目的基因序列；SDS-PAGE结果显示，在IPTG诱导下，E.coli BL21表达菌成功表达了一相对分子量（Mr）约为20kDa的目的蛋白，目的蛋白在表达菌中能够以可溶性蛋白形式表达；利用纯化的重组蛋白TpF1免疫新西兰兔，ELISA法测定兔免疫血清特异性抗体效价在1:20480以上；WesternBlot检测结果显示兔免疫血清、Tp Nichols标准株和Tp临床分离株（nhgz01和nhgz02）感染兔血清与重组蛋白TpF1有特异性抗体反应；建立的TpF1-ELISA法检测各期梅毒阳性血清、交叉血清及阴性血清，其特异性和敏感性分别为100%和98%。结论：1成功构建了pET28a-TpF1原核表达载体，并在E.coli BL21表达菌中表达出相对分子量（Mr）为20kDa的重组蛋白TpF1。2重组蛋白TpF1具有较强的免疫原性，能诱导新西兰兔产生高效价的特异性抗体。3重组蛋白TpF1具有良好免疫反应性，检测梅毒血清的敏感性和特异性分别为98%和100%，可作为梅毒血清学诊断的候选抗原之一。