林麝肠道乳酸菌耐药基因PCR检测及复合微生态制剂的研制

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本研究通过检测林麝肠道分离的14株乳酸菌的耐药基因,为微生态制剂菌株的选择提供一个耐药性的参考,并且为后续监测林麝肠道乳酸菌耐药基因携带情况提供对比数据。同时采用林麝肠道分离的乳酸菌研制一种复合微生态制剂,对复合微生态制剂在林麝养殖上的应用进行了初步的研究。(1)本研究采用PCR (Polymerase chain reaction)方法对14株林麝肠道乳酸菌进行了磺胺类(sul1、sul2、sul3),喹诺酮类(qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac(6’)-Ib-cr),四环素类(tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetM、tetW),氨基糖苷类(aph(3’)-Ⅱa ant(3")-Ⅰa、ant(6)),β-内酰胺类(blaTEA、blaSHV、blaCTX-M、bla),万古霉素(vanA、 vanB),氯霉素类(cat、cat A)这7类抗生素的26个耐药基因的检测。结果显示,磺胺类(sul1、sul2、sul3),喹诺酮类(qnrA、qnrB、qnrS、qepA),四环素类(tet A、 tetB、tetC、tetD、tetE、tetW),氨基糖苷类(aph(3’)-Ⅱa、ant(3")-Ⅰa、ant(6)),β-内酰胺类(blaTEM、 blaSHV、blaCTX-M、bla),万古霉素(vanA、vanB),氯霉素类(cat、catA)耐药基因检测结果为阴性。2个耐药基因检测阳性,包括喹诺酮类(aac(6’)-Ib-cr(57.14%))和四环素类(tetM(57.14%))(2)设计了3种不同配方的复合微生态制剂,给小白鼠饲喂后,分析结果发现C组小鼠盲肠内容物中乳酸菌总数大于另外两种,选择C组复合微生态制剂(植物乳酸菌:嗜酸乳杆菌:明串球菌=1:1:2)进行后续试验。对复合微生态制剂C进行安全性试验,结果显示其没有引起小白鼠机体不良反应,表明此复合微生态制剂是安全的。并且监测复合微生态制剂活菌数发现复合微生态制剂最佳使用时间是14d内,并且最佳储存温度为-20℃。复合微生态制剂C用于治疗林麝肠道致病性大肠杆菌感染的小白鼠,结果显示微生态制剂组肠道乳酸菌显著大于空白组和感染组(P<0.05)说明了复合微生态制剂能有效控制林麝肠道致病性大肠杆菌的增殖。腹泻林麝治愈率为50%(3/6),可见复合微生态制剂对消化道疾病有一定的疗效。
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