目的：研究在白介素-1β(IL-1β)诱导的人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)转分化过程中Lipocalin2蛋白及mRNA的动态表达变化及其意义。 方法：以含10％胎牛血清的DMEM为培养基，在37℃培养箱(5％CO2)内复苏并传代HK-2细胞株，分步做以下实验： 1．在IL-1β诱导的HK-2细胞株转分化过程中细胞形态学观察和细胞E-钙粘蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Lipocalin2蛋白表达的免疫细胞化学检测：取对数生长期细胞，用0.25％胰酶消化后制备细胞悬液，并以1×105/孔接种于预置细胞爬片的6孔培养板中。待细胞60％-80％融合后，用无血清DMEM培养基同步化处理24小时，然后加入终浓度为10ng/ml的IL-1β。根据IL-1β作用时间不同分组为：3h组、6h组、12h组、24h组、48h组、72h组，同时设未加IL-1β(用DMEM培养基替代)的细胞为空白对照组，每个实验组设3个复孔。各组终止培养后，在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化；取出细胞爬片，用4％多聚甲醛固定，0.3％ Triton X-100破膜，3％H2O2灭活内源性过氧化物酶，5％BSA封闭非特异抗原后滴加一抗(羊抗人E-cad 1：100，小鼠抗人α-SMA 1：100，小鼠抗人Lipocalin2 1：400，以PBS代替一抗作为阴性对照)，4℃孵育过夜，再滴加二抗，37℃孵育20 min，DAB显色，苏木素复染，盐酸酒精分化，酒精梯度脱水，二甲苯透明，封片剂封片后显微镜下观察细胞α-SMA、E-cad及Lipocalin2蛋白表达，并采用Image-Pro P1uS(IPP)6.0专业图像分析软件进行半定量分析。 2．Lipocalin2 mRNA在IL-1β诱导的HK-2细胞株转分化过程中的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测：取对数生长期细胞，用0.25％胰酶消化后制备细胞悬液，并以1×105/孔接种于6孔培养板中。待细胞60％-80％融合后，用无血清DMEM培养基同步化处理24小时，然后加入终浓度为10 ng/ml的IL-1β。根据IL-1β作用时间不同分组为：3h组、6h组、12h组、24h组、48h组、72h组，同时设未加IL-1β(用DMEM培养基替代的细胞作为空白对照组，每个实验组设3个复孔。取1×106细胞提取细胞总RNA，然后进行Lipocalin2 mRNA的RT-PCR检测，PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像仪下观察Lipocalin2 mRNA的变化，并用Multi Gauge V3.0分析软件对PCR条带进行平均面积灰度扫描分析。 结果： 1．在IL-1β诱导的HK-2细胞株转分化过程中细胞形态学变化：空白对照组HK-2细胞呈立方形或球形，具有典型的上皮细胞铺路石样特征，IL-1β刺激细胞3h、6h、12h细胞形态改变不甚明显，24h少量细胞拉长、肥大，呈梭形样改变，48h更多细胞呈长梭形，72h呈梭形改变的细胞比例更大，细胞虽铺满单层，但细胞间隙增大，丧失“铺路石"样改变。 2．细胞E-cad及α-SMA蛋白在IL-1β诱导的HK-2细胞株转分化过程中的表达变化：细胞E-cad及α-SMA蛋白均在胞浆表达，DAB染色为棕黄色或黄色。空白对照组HK-2细胞形态正常，胞核呈淡蓝色，几乎无a-SMA表达，而E-cad染色呈强阳性。IL-1β刺激3h细胞E-cad表达无明显变化，6h细胞E-cad表达较刺激前减弱，随IL-1β作用时间的延长， E-cad表达逐渐减少。IL-1β刺激3h及6h细胞α-SMA表达无明显变化，12h α-SMA表达明显上调，随IL-1β作用时间的延长，α-SMA表达进一步增加，高峰出现在72h作用时间点。 3．细胞Lipocalin2 mRNA及蛋白在IL-1β诱导的HK-2细胞株转分化过程中的表达变化：与空白对照组比较，IL-1β刺激3h及6h Lipocalin2 mRNA的表达无明显变化，12h Lipocalin2 mRNA表达量明显增高，为空白对照组的1.7倍，48h达高峰，为空白对照组的2.8倍，72h下降。Lipocalin2蛋白主要表达于细胞的胞浆之中，DAB染色为棕黄色或黄色。Lipocalin2蛋白表达与Lipocalin2 mRNA表达同步，IL-1β刺激12h细胞Lipocalin2染色明显增加，48h达到高峰，72h下降。 结论： 1．IL-1β可时间依赖性的诱导人肾小管上皮细胞转分化。 2．在IL-1β诱导肾小管上皮细胞转分化过程中，Lipocalin2 mRNA及蛋白的表达呈先增高后下降的同步变化，提示Lipocalin2对肾小管上皮细胞转分化可能起重要的调节作用。