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本文研究了不同冷冻方法、冷冻保护液、冷冻前CB处理、卵母细胞的成熟阶段和成熟类型、不同基础液以及解冻时的水浴温度等因素对山羊卵母细胞冷冻-解冻后体外受精和激活效果的影响;同时,对不同冷冻方法、冷冻保护液、解冻时的水浴温度以及EFS40中的不同添加成分对山羊胚胎冷冻-解冻后体内、外发育效果等也进行了研究。研究表明,常规冷冻法、玻璃化细管法和OPS法都可用于山羊卵母细胞的冷冻保存,但OPS法的冷冻保存效果略好于常规冷冻法和玻璃化细管法。在常规冷冻法中,1.5mol/L EG与1.5mol/L PROH的冷冻保护效果基本一致,但前者的冷冻保护效果略好于后者(IVF后卵裂率25.81%(16/62):23.91%(11/46),桑囊发育率3.23%(2/62):2.17%(1/46));在玻璃化细管法中,EDFS40的冷冻保护效果略好于20%EG+20%DMSO(IVF后卵裂率25.30%(21/83):24.56%(14/57),桑囊发育率3.61%(3/83):3.51%(2/57)),而在OPS法中则是后者略好于前者(IVF后卵裂率33.33%(19/57):30.99%(22/71),桑囊发育率5.26%(3/57):4.23%(3/71)),但两种玻璃化液的冷冻保护效果间差异不显著。冷冻前将山羊卵母细胞在含有0.75mg/L CB的成熟培养液中37℃处理30min,可显著或极显著的提高冷冻-解冻后卵母细胞的形态正常率(常规冷冻法84.93%(62/73):67.92%(36/53),玻璃化细管法90.22%(83/92):73.13%(49/67),OPS法79.17%(57/72):59.57%(28/47)),同时可使其发育效果得到一定程度的提高(常规冷冻法:IVF后卵裂率25.81%(16/62):11.11%(4/36),桑囊发育率3.23%(2/62):0;玻璃化细管法:IVF后卵裂率25.30%(21/83):12.24%(6/49),桑囊发育率3.61%(3/83):0;OPS法:IVF后卵裂率33.33%(19/57):17.86%(5/28),桑囊发育率5.26%(3/57):0)。与成熟卵母细胞相比,GV期卵母细胞对低温更敏感,使用现有的冷冻方法和冷冻保护液冷冻保存GV期山羊卵母细胞尚无法得到满意的结果。采用玻璃化细管法冷冻保存的山羊卵母细胞,37℃与25℃水浴解冻后的形态正常率间差异不显著,37℃水浴解冻后的形态正常率显著的高于32℃水浴解冻者,但三者在发育效果上无统计学差异。采用三步法和一步法对常规冷冻的山羊卵母细胞进行解冻,解冻后卵母细胞的发育效果间无显著差异(激活后卵裂率28.95%(11/38):30.23%(13/43),桑囊发育率5.26%(2/38):4.65%(2/43)),说明可以用一步法代替三步法进行解冻,从而简化解冻程序。将常规冷冻的体内外成熟的山羊卵母细胞解冻后的激活效果进行比较,二者的发育效果间不存在显著差异。在山羊胚胎冷冻保存方面,以1.5mol/L EG、1.5mol/L PROH和1.5mol/L甘油为冷冻保护液对山羊胚胎进行常规冷冻保存,三者对山羊胚胎的冷冻保护效果无显著差异,其中以1.5mol/L EG的冷冻保护效果为佳。以EFS40为玻璃化液对山羊胚胎进行细管法和OPS法玻璃化冷冻,其结果与常规冷冻间差异不显著,表明三种方法均可用于山羊胚胎的冷冻保存。采用25℃和37℃水浴对常规冷冻和玻璃化冷冻后的山羊胚胎进行解冻,从解冻后的发育效果看,二者间无显著差异,但37℃水浴解冻后的胚胎发育效果略好于25℃。还比较了玻璃化液EFS40中添加FCS和BSA后与既不添加FCS也