【摘 要】
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当前被应用的肿瘤治疗方法中,分子靶向治疗和免疫治疗被认为是精准、有效的治疗手段。但是分子靶向治疗对肿瘤细胞的位点特异性要求高,长期使用会产生耐药性;免疫疗法如CAR-T疗法等操作难度大,花费昂贵,并不容易广泛推广。因此,利用简单有效的办法开发肿瘤细胞的特异性治疗具有重要意义。细胞表面工程是在细胞表面进行设计,从而调节细胞功能和细胞与其他材料相互作用的方法。利用细胞表面工程可以在肿瘤细胞表面引入正交
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当前被应用的肿瘤治疗方法中,分子靶向治疗和免疫治疗被认为是精准、有效的治疗手段。但是分子靶向治疗对肿瘤细胞的位点特异性要求高,长期使用会产生耐药性;免疫疗法如CAR-T疗法等操作难度大,花费昂贵,并不容易广泛推广。因此,利用简单有效的办法开发肿瘤细胞的特异性治疗具有重要意义。细胞表面工程是在细胞表面进行设计,从而调节细胞功能和细胞与其他材料相互作用的方法。利用细胞表面工程可以在肿瘤细胞表面引入正交反应基团。利用正交反应开发的双“点击”前荧光载体可以模块化的构建生物偶联物,不仅可以让蛋白质、聚合物和抗体等进行偶联,还能够实时监测偶联过程,实现原位光学检测。因此,我们设计了具有双点击性能的荧光探针DBCO-Cy7-Nor,利用它作为前荧光载体,通过两个不同的点击化学反应,构筑高分子-细胞偶联物,并实现对偶联过程的实时光学监测,希望借助双点击荧光探针作为与细胞偶联的桥梁,开发出聚合物、抗原、多肽等与肿瘤细胞简单、高效的结合,为进一步的肿瘤治疗带来更多可能。我们主要的工作内容如下:1.化学合成了荧光探针DBCO-Cy7-Nor和以四嗪为正交反应基团的聚乙二醇。2.测试了荧光探针DBCO-Cy7-Nor发生单点击和双点击时不同的荧光强度变化,探究小分子偶联与高分子偶联时荧光变化规律是否相同,以及不同分子量的高分子链是否仍具有相同的荧光变化。测试结果证明,只有当DBCO-Cy7-Nor上两个正交基团都发生反应时,荧光出现明显增强;并且,无论荧光探针DBCO-Cy7-Nor与小分子、高分子链还是蛋白质发生双点击反应时,都具有荧光显著增强的特点。3.荧光探针DBCO-Cy7-Nor的体外实验:通过He La细胞的MTT、Live/Dead实验测试了细胞活力,证明了DBCO-Cy7-Nor具有良好的生物相容性;用He La细胞进行了体外的点击化学实验,我们发现,DBCO-Cy7-Nor发生双点击时,在He La细胞表面带有一层红色荧光物质,证明了DBCO-Cy7-Nor能够在肿瘤细胞表面,可视的构建高分子-细胞偶联物。
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