【摘 要】
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本文利用分子生物学技术对新城疫病毒（NDV）融合蛋白（F）基因进行了克隆、表达并对表达产物免疫效果等方面进行了系统研究，取得了较满意的结果，为进一步构建高效表达F基因的NDV基因工
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本文利用分子生物学技术对新城疫病毒（NDV）融合蛋白（F）基因进行了克隆、表达并对表达产物免疫效果等方面进行了系统研究，取得了较满意的结果，为进一步构建高效表达F基因的NDV基因工程疫苗及其商品化生产提供了可靠的理论依据和坚实的试验基础。 本试验内容包括： 1．利用基因体外重组技术，从含有NDV F48E8株F基因的质粒PE1/E2-3中，用自行设计的引物通过PCR法扩增出全长F基因，并将基因克隆到FPV转移载体pEFgpt12S的S启动子下游，构建成含有NDV F48E8株F基因的FPV转移pEFNDF。 2．将构建好的FPV转移载体pEFNDF用磷酸钙法转染FPV感染2h的鸡胚成纤维细胞（CEF），以载体中的大肠杆菌gpt基因作筛选标记，用含霉酚酸的选择性培养基进行筛选，得到稳定的表达NDV F基因的重组鸡痘病毒（rFPV），用PCR和斑点杂交证明了RFPV基因组中含有NDV F48E8 F基因，ELISA和wastern blotting证明了FPV感染的细胞上清中存在F蛋白。 3．用两种不同剂量rFPV、新城疫病毒Ⅳ系苗、rFPV+Ⅳ及FPV分别免疫11日龄小鸡，每周采血测定血清HI效价、抗F蛋白ELISA值和抗FPV中和抗体水平，并于34日龄时用NDV强毒F48E8株攻毒。结果表明，在rFPV免疫的鸡中，查到了F蛋白的抗体，低剂量接种组对NDV强毒的攻击能提供80％的保护并可引起较高滴度的FPV中和抗体，高剂量接种组可提供更高保护，rFPV+Ⅳ免疫组对NDV强毒攻击可提供100％保护，
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