以鲫鱼头肾淋巴细胞为研究对象,用细菌内毒素体外诱导其凋亡,通过荧光染色、DNA电泳、TLJNEL、电镜以及流式细胞仪分析等多种凋亡检测方法,检测凋亡发生情况。结果显示,在10μg/ml以上浓度的内毒素作用18后或以100μg/ml浓度的LPS作用6h以上,淋巴细胞即可出现明显的凋亡形态学变化,表现为染色质凝集和周边化,核断裂,形成凋亡小体,DNA发生特异降解产生典型的“梯状”电泳图谱,呈现TUNEL阳性标记等,并通过流式细胞术证实这种凋亡具有时问和剂量的依赖性。 在确证内毒素能诱导鲫鱼淋巴细胞凋亡的基础上,对内毒素引起淋巴细胞凋亡的信号转导机制和基因表达变化作了研究。结果显示,经不同浓度的内毒素诱导不同时间后,鲫鱼淋巴细胞内线粒体膜电位(△ψ)和ATP含量明显下降,而氧自由基浓度明显上升,提示线粒体死亡通路可能是LPS诱导鲫鱼淋巴细胞凋亡的机制。在凋亡相关基因的研究中,发现在100μg/ml LPS诱导6、12、24h后发生凋亡过程中,细胞内相关基因的表达发生了不同的变化。其中TNF-α基因的表达在正常对照组和三个时问段的诱导组中没有发生明显变化,而Bcl家族的抑制凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax的表达量发生了显著的变化,Bcl-2随着诱导时间的延长表达下降,而Bax表达增加。对NO合成酶(NOS)基因表达的检测发现,与正常对照组相比,NOS基因在诱导组中表达的变化不明显,提示NO与淋巴细胞凋亡的关系不大。鱼类淋巴细胞凋亡过程中TNF-α和NOS基因表达的变化不同于巨噬细胞的研究结果,提示内毒素诱导淋巴细胞凋亡的机制不同于巨噬细胞。 总结实验结果,我们认为内毒素能在体外直接诱导鱼类淋巴细胞凋亡,而凋亡的发生涉及线粒体信号通路和Bcl家族相关基因的调控,内毒素诱导淋巴细胞凋亡的分子机制不同于巨噬细胞。