【摘 要】
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由于抗生素具有抑菌和杀菌作用,在蜂业养殖中常被非法使用,导致消费者可能长期低剂量摄入抗生素危害健康。因此,本文基于核酸适配体与目标物的特异性识别,分别建立了针对氯霉素(CAP)和四环素(TC)的荧光检测方法,并用于蜂蜜中CAP与TC的检测。论文主要内容如下:第一部分,基于核酸适配体与可调节催化活性的氯化血红素模拟酶检测蜂蜜中CAP。氯化血红素(hemin)单体催化活性高,可以催化过氧化氢(H_2O
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由于抗生素具有抑菌和杀菌作用,在蜂业养殖中常被非法使用,导致消费者可能长期低剂量摄入抗生素危害健康。因此,本文基于核酸适配体与目标物的特异性识别,分别建立了针对氯霉素(CAP)和四环素(TC)的荧光检测方法,并用于蜂蜜中CAP与TC的检测。论文主要内容如下:第一部分,基于核酸适配体与可调节催化活性的氯化血红素模拟酶检测蜂蜜中CAP。氯化血红素(hemin)单体催化活性高,可以催化过氧化氢(H2O2)氧化酪胺产生荧光,而hemin二聚体催化活性低无法进行有效催化反应。将hemin单体分别修饰在CAP适配体的3’端及适配体互补链的5’端,由于形成双链结构,使hemin形成二聚体。当CAP存在时,适配体与CAP结合,双链解离,hemin二聚体分离成为单体形态,可催化酪胺氧化而产生荧光,以320 nm为激发波长,通过在410 nm处测定溶液的荧光强度可对CAP进行定量检测。在优化条件下,CAP的检测线性范围为0.110 ng mL-1,检出限为0.07 ng mL-1。将此方法用于蜂蜜中CAP的检测,加标回收率为94.3%117%,与ELISA的检测结果一致,说明建立的方法可用于实际蜂蜜样品中CAP的快速检测。第二部分,四面体DNA纳米结构磁性微球(MB)的构建。四面体DNA纳米结构组装效率高、具有机械刚性且易于修饰化学基团,在MB表面可调控适配体密度,提高检测灵敏度。与直接将适配体连接至MB表面相比,适配体密度和空间取向性可调控,可避免适配体之间的相互缠绕。检测目标DNA,四面体DNA上的适配体可迅速与目标DNA结合,结合时间相较于MB表面直接连接适配体从120 min缩短至10 min,检测范围由0.5 nmol L-1100 nmol L-1拓宽至0.01 nmol L-130 nmol L-1,且不受复杂介质的影响。说明通过在MB表面连接四面体DNA作为支架用于检测目标DNA,具有快速、灵敏的特点,且特异性和抗干扰能力强。第三部分,基于四面体DNA纳米结构修饰的MB与杂交链式反应(HCR)用于蜂蜜中TC检测。利用顶端含有TC适配体互补链的四面体DNA纳米结构作为支架修饰在MB表面,适配体与互补链结合,用于TC检测,可以增强适配体的空间取向性,提高检测效率、降低复杂环境因素对检测结果的干扰。通过HCR放大检测信号,可提高检测的灵敏度。当体系中存在TC时,TC与适配体结合并脱离四面体DNA纳米结构,露出互补链引发HCR循环,修饰FAM荧光基团的发卡结构FAM-H1与FAM-H2依次连接。加热使四面体DNA从MB脱离,通过检测上清液在522 nm处的荧光强度,可定量检测TC含量,线性范围为0.050.15 ng mL-1,检出限为0.035 ng mL-1。用于蜂蜜中TC含量的检测,加标回收率为94.9%108%,与ELISA的检测结果一致,说明所建立的方法可以用于实际蜂蜜样品中TC的检测。
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