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黄鳝是一种生活在淡水中具有自然性逆转现象的雌雄同体鱼类,是研究脊椎动物性腺分化发育机制的良好模型。抗苗勒氏管激素(AMH),是一种糖蛋白,属转化生长因子β超家族。在哺乳动物中,AMH负责雄性胚胎苗勒氏管的退化和性腺的发育。硬骨鱼除了鲟鱼之外,虽然没有苗勒氏管,但是amh基因已经在许多硬骨鱼中被克隆出来,并且性腺表达AMH,表明AMH在硬骨鱼的性腺发育和性别分化的过程中起到了一定的作用。本实验室前期克隆了amh cDNA全长序列。本文利用RT-PCR分析方法和原位杂交技术检测了amh在黄鳝卵巢、间性性腺和精巢中的表达情况。RT-PCR结果显示:amh只在雌性和雄性黄鳝的性腺组织中表达。原位杂交结果显示,amh在黄鳝的三种状态的性腺中都有表达,与RT-PCR分析结果是一致的。Amh在雌性黄鳝卵巢卵母细胞周围的颗粒细胞和雄性黄鳝精巢生殖褶上的精小囊周围的支持细胞中有表达,有些Ⅳ时相卵母细胞周围的颗粒细胞为多层,amh只在靠近卵母细胞膜的颗粒细胞层表达；在间性性腺中,amh在退化卵母细胞周围的颗粒细胞和萌发的精巢生殖褶上的精小囊周围的支持细胞中都有表达,并且当间性性腺中的退化卵母细胞周围具有多层颗粒细胞时,amh在多层颗粒细胞中都有表达。
为了更好地了解AMH的功能和作用的机制,我们克隆了黄鳝抗苗勒氏管激素二型受体(amhrⅡ)基因的全长cDNA序列,黄鳝amhrⅡ cDNA全长1729bp,该cDNA序列含有一个1479bp的开放读码框(ORF),编码493个氨基酸。氨基酸序列分析表明:黄鳝AMHⅡ具有转化生长因子β二型受体家族的保守结构域:N端细胞外的配体结合结构域、单次跨膜结构域和细胞内的丝氨酸/苏氨酸激酶催化结构域。进化树分析表明:一脊椎动物转化生长因子β二型受体家族的系统进化树分为两大支,其中一大支包括活化素二型受体(activin typeⅡ receptor)分支、转化生长因子β二型受体(TGF-β typeⅡ receptor)分支和骨形态发生蛋白二型受体(BMP typeⅡ receptor)分支,另一大支包括哺乳类抗苗勒氏管激素二型受体(AMH typeⅡ receptor)分支和硬骨鱼类抗苗勒氏管激素二型受体(AMHtypeⅡ receptor)分支,黄鳝AMHRⅡ处于硬骨鱼类抗苗勒氏管激素二型受体分支。氨基酸同源性分析表明,黄鳝AMHRⅡ与青鳉(Dryzias latipes)AMHRⅡ同源性最高,为53.1％。利用RT-PCR分析方法和原位杂交技术检测了其在黄鳝卵巢、间性性腺和精巢中的表达情况。RT-PCR组织分布的结果显示,amhrⅡ职在雌性和雄性黄鳝的性腺组织中表达,与amh的组织表达模式是一致的。原位杂交结果显示,在雌性黄鳝中,amhrⅡ卵巢卵母细胞周围的颗粒细胞中有表达,有些Ⅳ时相卵母细胞周围的颗粒细胞为多层,amhrⅡ只在靠近卵母细胞膜的颗粒细胞层表达；在间性黄鳝中,amhrⅡ在间性性腺中退化卵母细胞周围的颗粒细胞和萌发的精巢生殖褶上的精小囊周围的支持细胞中有表达；在雄性黄鳝中,amhrⅡ在精巢生殖褶上的精小囊周围的支持细胞中有表达,并且在精小囊之间的间质细胞中也检测到了amhrⅡ的表达。以上结果表明,AMH和AMHRⅡ可能在黄鳝性腺的发育和性逆转过程中发挥了重要的作用。