花生红衣中原花青素的提取纯化及其生物活性研究

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为实现花生红衣的高值化利用,本研究以花生红衣原花青素(proanthocyanidins of peanut skins,PSPC)为研究对象,通过提取和分离纯化,得到纯度较高的原花青素,再进行成分分析,最后对其进行相关的功能性评价,所得结果如下:(1)以乙醇溶液为提取溶剂,经辅助超声处理,以单因素和正交实验对原花青素的提取工艺进行了优化,获得各因素对原花青素提取效果的影响主次依次为:超声时间>乙醇浓度>料液比>超声温度;最佳提取条件为:超声时间15 min、乙醇浓度60%、料液比(g/m L)1:45、超声温度35℃、水浴温度50℃、水浴时间50 min。在此条件下,原花青素平均最大提取率为9.07%,试验结果较单独使用超声提取或水浴浸提皆有所提高。(2)通过静态吸附和解吸试验对8种大孔树脂型号进行选择,选出最佳型号为D4020,使用该型号树脂进行动态试验,对上样流速、上样浓度、洗脱液浓度、洗脱流速几方面进行考察,得出最佳纯化方案为上样流速1m L/min,上样浓度1.5mg/m L,洗脱液为40%乙醇,洗脱流速1m L/min,最终所得纯化物纯度可达97.35±1.58%。经UPLC-Q-TOF/MS检测分析,纯化物出峰时间在4-7min内较为集中,其中有至少5种单倍体和10种原花青素低聚物。单倍体含儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、原儿茶酸及表儿茶素衍生物等,低聚体中A型低聚体4种,B型低聚体6种,已鉴定出的二聚体由表儿茶素单体通过A型连接键连接,或由表儿茶素没食子酸酯与儿茶素通过B型连接键连接,三聚体由表儿茶素单体经B型连接键连接,或由表儿茶素和儿茶素经B型连接键连接。(3)通过对PSPC生物活性研究,原花青素对DPPH自由基有很强的清除作用,对ABTS自由基有较强的清除作用,皆与原花青素质量浓度呈正相关关系,且原花青素对DPPH和ABTS自由基的清除能力明显较维生素C(Vitamin C,VC)强;原花青素对脂质氧化有较好的抑制作用,经PSPC和VC浸渍后的猪肉脂肪其酸价、POV和TBA值明显较空白组低。在酸价测定方面,0.1%的PSPC抑制效果最优,0.1%的VC溶液抑制效果强于0.05%、0.15%、0.2%的PSPC;在POV测定方面,0.2%的PSPC抑制效果最优,而0.1%的VC抑制效果与0.15%的PSPC抑制效果大体相似;在TBA值测定方面,0.2%的PSPC抑制效果最优,0.1%的VC抑制效果介于0.15%与0.2%的PSPC之间。PSPC对α-Glu和α-Amy都有抑制作用,阿卡波糖对α-Glu抑制效果优于原花青素,而对α-Amy的抑制效果原花青素较优。体外消化试验中,PSPC在胃环境条件下消化率较低,经过2.5 h胃环境反应消化率仅14.2%,而经2.5 h肠道环境反应后,消化率达到54.1%。证明PSPC在胃环境条件下消化效果不明显,在肠道环境条件下消化效果较好,即PSPC在体内的主要消化吸收器官为肠道。
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