三株金线莲内生真菌次生代谢产物研究

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目的:植物内生真菌(Endophytic fungi)是指一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌。由于内生真菌与植物长时间共存,互相影响,所以有可能会使内生真菌拥有特殊的代谢途径,从而影响次级代谢产物的结构类型和生物活性。金线莲(Anoectochilus roxburghii)具有抗炎、肝脏保护、免疫调节、镇定、降血糖和降血脂等药理作用,素有“药王”之称。但是目前关于金线莲植物的内生菌研究较少,因此我们对其内生菌进行研究。最终选取三株分离自中国福建省永安市的金线莲新鲜叶子的植物内生菌(欧克安拟盘多毛孢Pestalotiopsis oxyanthi,杂色曲霉Aspergillus versicolor和孔曲霉Aspergillus ostianus)进行次级代谢产物研究,期望发现具有良好活性的新颖化合物,为先导化合物的发现与药物研发做出贡献。方法:关于所选三株真菌的研究内容主要包括大米固体发酵培养、次级代谢产物提取分离和生物活性筛选研究。利用ODS、正相硅胶柱、Sephadex LH-20和HPLC等方法分离纯化单体化合物。综合运用核磁共振、计算ECD和GIAO NMR实验、铑盐诱导实验、选择性氧化实验和X-ray单晶衍射实验等技术来确定化合物的平面结构和立体构型。构建细胞毒活性、免疫抑制活性和抗炎活性筛选模型对部分化合物完成相关活性的筛选实验。结果:最终从三株植物内生菌中共分离并鉴定109个单体化合物,其中41个为新化合物。从欧克安拟盘多毛孢(Pestalotiopsis oxyanthi)中共分离得到34个化合物,其中16个为新化合物,包括12个azaphilone类化合物,1个直链聚酮和3个甾体(第一章)。从杂色曲霉(Aspergillus versicolor)中共分离得到43个化合物,其中13个为新化合物,包括2个异香豆素,2个苯并内酯,1个苯并吡喃,1个呋喃甲酸衍生物,1个双烷基二酮哌嗪类化合物,1个麦角固醇型甾体,1个pseurotin类生物碱,2个butyrolactone类化合物和2个diphenol类化合物(第二章)。从孔曲霉(Aspergillus ostianus)中共分离得到32个化合物,其中12个为新化合物,包括9个羟基苯乙酸化合物,1个异香豆素,1个三联苯衍生物和1个其它类化合物(第三章)。对前三章分离得到的部分化合物进行细胞毒活性、免疫抑制活性和抗炎活性筛选实验发现部分化合物具有相应的活性。另外,第四章综述了2011年至2020年间文献报道过的所有拟盘多毛孢属真菌的次生代谢产物研究进展。结论:金线莲来源三株内生真菌次级代谢产物种类差别较大,且不同类型化合物的活性结果也有差异。本论文中众多新化合物的发现极大地丰富了三种真菌次生代谢产物的种类和数目。在活性方面,具有良好免疫抑制活性和抗炎活性的甾体新化合物的发现为该类化合物的继续研究奠定了一定的基础。创新点:首次分离得到9位含有甲基的azaphilones类化合物(12个);首次系统确定azaphilones类化合物母核和支链的构型以及探索其单晶培养条件;首次从真菌次级代谢产物中分离得到23位含有甲基的麦角固醇型甾体;首次对除海洋来源以外的孔曲霉次生代谢产物进行研究,并且首次从孔曲霉中分离得到羟基苯乙酸类化合物(9个);首次对2011至2020年间报道的所有拟盘多毛孢属真菌次级代谢产物研究进展进行了综述。
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