【摘 要】
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研究目的:近年来已证明微小RNA在血浆/血清中可被稳定检测,并在食管癌、胃癌、胰腺癌、结直肠癌、肝癌等多种消化系统肿瘤诊断中发挥重要作用。本实验目的是进一步探讨微小RNA-1290（microRNA-1290,miRNA-1290）靶向调控NDRG1及白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）表达参与结肠癌细胞侵袭和迁移能力的具体机制。研究方法:（1）免疫组织化学染色法和RT-PCR法检
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研究目的:近年来已证明微小RNA在血浆/血清中可被稳定检测,并在食管癌、胃癌、胰腺癌、结直肠癌、肝癌等多种消化系统肿瘤诊断中发挥重要作用。本实验目的是进一步探讨微小RNA-1290（microRNA-1290,miRNA-1290）靶向调控NDRG1及白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）表达参与结肠癌细胞侵袭和迁移能力的具体机制。研究方法:（1）免疫组织化学染色法和RT-PCR法检测结肠癌组织及其癌旁组织,结肠癌细胞（HT-29、SW480和SW620）与HCoEpiC正常结肠上皮细胞中IL-6及miRNA-1290表达。（2）设计并构建miRNA-1290模拟物（miRNA-1290 mimics）和miRNA-1290抑制物（miRNA-1290 inhibitor）分别强化和抑制结肠癌细胞miRNA-1290的表达,并采用RT-PCR检验转染效果（3）结合miRNA-1290 inhibitor及mimic处理,Western blot和ELISA法分别检测结肠癌细胞中p-NF-κB、NF-κB、NDRG1、E-cadherin、vimentin的蛋白改变以及IL-6外泌量变化。（4）小干扰RNA（siRNA）及中和性抗体靶向下调IL-6,miRNA-1290 mimic处理前后通过划痕实验检测结肠癌细胞迁移能力的改变,TranswellTM实验验证对侵袭能力的影响。研究结果:1、通过与癌旁正常组织以及结肠上皮细胞相比,结肠癌中IL-6与miRNA-1290表达均较高并呈正相关关系。2、上调miRNA-1290表达可抑制NDRG1表达及诱导NF-κB信号通路活化及上.皮间充.质转化（EMT）,而下调miRNA-1290表达则恢复NDRG1、E-cadherin表达并抑制p-NF-κB和vimentin形成3、miRNA-1290通过靶向下调NDRG1表达促进NF-κB信号通路和IL-6的活化与分泌。4、划痕实验发现上调miRNA-1290表达可增强结肠癌细胞迁移能力,而敲低IL-6后细胞愈合率则出现明显逆转5、miRNA-1290 mimic处理促进了结肠癌细胞的侵袭发生,而抗体中和IL-6可有效降低侵袭细胞数。研究结论:1、miRNA-1290可促进结直肠癌细胞的迁移和侵袭;2、结肠癌细胞中miRNA-1290通过靶向抑制NDRG1从而促进NF-κB/IL-6调控轴诱导的迁移和侵袭发生。
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