糙皮侧耳生长发育相关非编码milR-1的鉴定及功能研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuyansua
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
MicroRNA(miRNA)是一组内源的非编码RNA,长度约为20-24 nt。它们通过部分碱基互补配对结合于靶基因mRNA的UTR区,从而降解靶基因mRNA或者抑制靶基因蛋白质的翻译。在前期研究中,我们以四个不同生长发育阶段的糙皮侧耳菌丝体(Myc),原基体(Pri),小菇(Yfb),大菇(Mfb)为材料,对糙皮侧耳miRNA进行高通量测序,预测得到糙皮侧耳新的miRNA-like smallRNAs(milRNA),从中发现了在不同生长发育阶段表达差异显著的milRNA,命名为Po-MilR-1。在本研究中,我们对鉴定得到的Po-MilR-1及其靶基因poh-1在糙皮侧耳子实体发育中的功能进行研究,结果如下:1、对糙皮侧耳菌丝期、原基期、小菇期、大菇期中的Po-MilR-1及其靶基因poh-1的表达量进行了qRT-PCR分析。qRT-PCR结果显示:Po-MilR-1及其靶基因poh-1呈现出相似的空间表达模式,Po-MilR-1和疏水蛋白poh-1在菌丝体中基本不表达,而在子实体中表达量增加,表现出显著的表达差异。且当Po-MilR-1表达量越高,poh-1的表达量越低。其中,原基期Po-MilR-1的相对表达量约是poh-1的4.6倍,小菇期Po-MilR-1的相对表达量约是poh-1的23.5倍,大菇期Po-MilR-1的相对表达量约是poh-1的32倍。由此猜测,Po-MilR-1可能抑制疏水蛋白poh-1的表达,并且参与糙皮侧耳的子实体发育。2、糙皮侧耳中共有4个Po-MilR-1前体基因位点,根据mfold分析,发现一条前体序列能形成稳定的二级结构,它的发夹结构的最小值自由能为-49.3 kcal/mol,该序列长272 bp,并且命名为pre-Po-MilR-1。poh-1基因的DNA序列全长为518 bp,由4个内含子和3个外显子组成,c DNA序列全长为342 bp。该基因编码113个氨基酸,其中有8个半胱甘酸。通过对该基因编码的氨基酸结构域预测发现,其属于hydrophobin超家族中的成员。系统进化树显示糙皮侧耳的poh-1基因与Pholiota nameko(滑菇)距离最近。3、分别构建了Po-MilR-1和其靶基因poh-1的超表达载体pGEH-gpd-pre-Po-MilR-1、pGEH-gpd-poh-1。并且通过根癌农杆菌介导的遗传转化体系侵染到糙皮侧耳菌丝体中,通过PCR、qRT-PCR、绿色荧光蛋白基因eGFP表达检测、Southern blot等技术验证阳性转化子。qRT-PCR定量分析表明超表达转化子相比野生型菌株表达量都有不同程度升高。poh-1的超表达的转化子中poh-1基因的相对表达量最高可达4.2倍,Po-MilR-1超表达的转化子中Po-MilR-1的相对表达量最高可达3.8倍。4、通过十字交叉法测量转化子的生长速度发现,Po-MilR-1超表达转化子的生长速度比野生型慢且差异显著,这说明Po-MilR-1的超表达影响了糙皮侧耳菌丝的生长速度。在高温胁迫实验中,poh-1超表达转化子表现出比野生型更高的热稳定性。
其他文献
投资是公司财务决策的核心问题,理性、高效的投资不仅是公司持续健康发展的保证,也是国民经济稳健发展的基础。据统计数据显示,从1980至2018年我国GDP平均年增长率达到9.73%,固定资产投资年平均增长率达到18.85%,都呈现较高的增长态势。然而,我国宏观经济与资本市场发展速度难以匹配,公司投资异化问题普遍存在,那么造成投资效率低下的主要原因是什么呢?20世纪70年代以来,学者们在“理性人”假设
当前,体育家庭作业的布置存在粗放式、笼统化的现象,表现为作业形式单一、针对性不高、科学性不强、缺乏趣味性等问题。“双减”背景下体育家庭作业应在设计与呈现、组织与实施、监测与激励方面予以优化,使体育家庭作业有助于学生体育知识、技能和方法的巩固与运用。体育兴趣和锻炼习惯的养成,有助于发展和谐的亲子关系、共建康健家庭。
“符号”一词对于大众来说并不陌生,它承载着人类对世界的认知,紧系着人们的生活方式和审美趣味。虽说符号学的定义最初是由语言学家提出的概念,但其结构模式-----符号本身、符号之间的组织方式、符号出现的语境,也同样适用于艺术领域。研究当代纤维艺术的符号,本质上是在探索当代纤维艺术中引入符号这个概念后,带来的符号化创作方式,以及分析这种方式给纤维艺术的发展带来的价值。基于二元论的哲学原理,文章将当代纤维
学位
学位
江苏省苏州工业园区方洲小学挖掘地方美育资源,汲取昆曲和评弹的艺术元素,聘请戏曲专业教师,重组戏曲艺术课程,把戏曲文化与学校美育结合,以点带面,逐步营造“戏韵墨彩,以美育人”的校园文化氛围,引导学生在校园活动中体验戏曲艺术之美,感受中国传统文化精髓,增强文化自信。
本文采用个案研究作为主要研究方法。在乡村治理过程中,村干部的权力不仅体现为一种公开权力,也潜藏着一些隐性的权力,在乡村事务治理中,村干部的很多自由裁量权就是其隐性权力的重要内容,那么,村干部的自由裁量权有多大,是否有边界,以及受到哪些因素影响。研究发现,笔者通过对山西A村一起土地纠纷调解事件的参与、访谈与观察后,同时,对村支书、村主任以及事件当事人双方进行深入访谈,获取了关于山西A村村支书在这起土
“扫黑除恶”专项斗争在取得显著成效的同时,更应在正确把握宽严相济刑事政策的前提下坚持罪责刑相适应原则,平衡扫黑除恶与人权保障的关系。根据现有的法律规定及司法解释,我国对单位犯罪与黑社会性质组织犯罪的界定有着本质区别。在司法实务中,涉及黑社会性质组织犯罪的单位类型有“单位主动蜕变”型、“以黑护商”/“以商养黑”型及“黑商混杂”型,但根据《刑法》第30条的规定可知:合法成立的单位组织并不能成为其刑事责
受疫情等因素叠加影响,当前和今后一段时间,我国财政将处于紧平衡状态。人民银行总分行提出勤俭节约办行的要求,近两年基层央行积极贯彻落实,努力压减相关费用。本文结合审计实践,从审计视角提出在当前大背景下,基层央行在固定资产管理中需要关注的问题,并提出针对性的建议。以期对基层央行固定资产管理工作有所帮助。
战国时期是汉字发展史上的一个重要阶段。由于社会、经济的发展,对文字的需求迅速增加,新造字大量涌现;书写工具和材料的改进,导致了字形和字体变化;长期的诸侯割据局面,使文字的地域性特点日益明显,言语异声,文字异形现象较为突出。战国时期的楚国已经形成有别于其他地区的文化体系,在文字方面也表现出突出的地方特点,与秦朝的规范字体小篆有所不同,已经产生了一定数量的异体字。本文选取《包山楚墓文字全编》中的楚文字