本课题拟从可以对受控基因的表达进行调控的细胞信号转导途径为着眼点，以人NPC细胞作为特异性受试细胞和进行对比，筛选合适处理剂量的Zn2+作为受试物，从而建立相应的体外细胞模型进行剂量．反应和时间序列分析，对不同NPC细胞中诱导性MT表达和NF-κB活化之间的相互关系及其对细胞转归的影响进行研究。 研究目的: 一．总体目标 探明锌对NPC细胞诱导转归的影响及其与诱导MT表达和NF-κB诱导活化相互作用的关系。 二．具体目标 1.筛选合适硫酸锌(ZnSO4)处理剂量和作用时间，观察不同剂量ZnSO4对人NPC细胞株细胞增殖和诱导凋亡的影响，进行时间和剂量效应关系的分析比较。 2.检测ZnS04对NPC细胞内MT诱导表达水平，确证MT诱导表达细胞模型的建立；分析其对TNF-α诱导的NF-κB活化的影响，初步探讨NPC细胞内NF-κB活化和MT蛋白表达的相互关系。 3.采用特异性抑制剂处理，建立细胞内MT和NF-κB干预的细胞模型，进行细胞转归与MT和NF-κB相互作用关系的验证。 研究内容和方法: 第1章锌处理对人NPC的细胞毒性和凋亡转归的影响 第2章锌诱导NPC细胞内MT表达和NF-κB信号诱导活化的关系及其干预作用 结果: 第1章Zn2+处理对人NPC的细胞毒性和凋亡转归的影响 第2章锌诱导NPC细胞内MT表达和NF-κB信号诱导活化的关系及其干预作用研究 另一方面，NF-κB抑制剂PDTC预处理30min以抑制TNF-α诱导的NF-κB活化，可明显抑制给予20μmol/L Zn2+处理(即PDTC+TNF-α+ZnSO4组)12h时MT蛋白水平，表现为WB检测明显低于TNF-α+ZnSO4处理组，提示NF-κB活化干预可部分抑制NPC细胞内MT的诱导表达。 讨论和结论: 1.不同剂量Zn2+可诱导人NPC细胞出现不同程度细胞毒性和凋亡转归。 表现为低剂量ZnSO4(1.25～20μmol/L)对人NPC未见细胞毒性，但从≥20μmol/L起随剂量增加和时间延长可以诱导CNE1和CNE2显著的细胞增殖抑制和诱导性凋亡，其中CNE2对该诱导性细胞转归的反应敏感性高于CNE1。 2.Zn2+可以诱导NPC细胞中MT表达增高，并且与增强细胞内NF-κB信号途径诱导活化有关。 表现为ZnSO4(20μmol/L)处理30min可增加TNF-α诱导的胞质内IκBα降解、NF-κB p65活化进入细胞核、以及NF-κB信号途径下游COX-2的转录表达；同时与Zn2+处理时12h时细胞内MT表达增高、分布泛化和核内表达有关。此外，TNF-α诱导NF-κB活化可参与对MT蛋白诱导合成的上调作用。 3.NPC细胞内MT合成和NF-κB活化的干预作用可影响二者的相互诱导性改变。 表现为TPEN可抑制Zn2+诱导12h时MT的合成和TNF-α处理30min诱导的NF-κB活化；而PDTC可抑制TNF-α诱导的NF-κB活化以及Zn2+处理12h时MT的诱导合成。进一步证实了NPC细胞中NF-κB和MT的相互影响关系。 4.NPC细胞中MT和NF-κB的相互作用可影响锌诱导的NPC细胞转归。 其中二者潜在交互对话的调控机制尚待进一步研究。