多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase, PPO)是一类铜蛋白,能有效地催化多酚类化合物氧化形成相应的醌类物质,在含酚废水处理、木质素降解以及染料脱色等领域得到较好的研究和应用,具有广泛的应用前景。茶叶细胞中富含多酚化合物和多酚氧化酶,在茶叶体内生物合成和制茶过程中的物质转化中起重要作用,是红茶和黑茶风味和特质形成的物质基础。本论文以分离自健康茶叶组织的内生真菌为材料,筛选产多酚氧化酶的菌株,研究菌株的培养条件,分离纯化多酚氧化酶,并应用于茶多酚的生物转化,为茶树内生真菌及其多酚氧化酶的利用打下基础。利用平板显色初筛和摇瓶复筛,从14株内生真菌菌株筛选出相对高产多酚氧化酶的菌株CSN-13,通过HPLC检测茶多酚溶液的变化,进一步确定菌株CSN-13产多酚氧化酶的能力。通过形态学鉴定和真菌ITS序列分析,初步鉴定菌株CSN-13为茴麻链格孢(Alternaria abutilonis)。将菌株CSN-13作为出发菌株,利用单因素和响应面法分别对液体发酵培养基和发酵条件进行优化,优化后的酶活比优化前分别提高了8.5倍和10倍。然后利用优化后条件对菌株CSN-13进行液体发酵,通过硫酸铵盐析沉淀、DEAE-阴离子交换层析、葡聚糖G-150凝胶层析等方法进行分离纯化多酚氧化酶,将获得的样品通过SDS-PAGE凝胶电泳后,通过考马斯亮蓝R-250染色,显示两条清晰的蛋白条带,相对分子量分别约为50 kDa和70 kDa。纯化倍数为3.50倍,回收率为3.15%。对纯化后的多酚氧化酶酶学性质进行研究,最适温度为30℃,最适pH为5.5。通过优化后确定产茶树多酚氧化酶的固体发酵培养基,然后将固体发酵后产物和纯化后的多酚氧化酶加入到一定浓度的茶多酚溶液中进行反应,通过HPLC检测,发现多酚物质含量变化大且出现多个未知峰,表明固体发酵和液体发酵产酶均有生物转化作用。