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仙草为唇形科一年生草本植物,含有丰富的生物活性成分,目前对仙草的研究主要集中在仙草多糖及其胶凝特性方面,化学成分及保健药理功效研究较少,还未见用于保肝。针对国内外仙草的研究现状,本课题选择了仙草为研究对象,采用不同极性溶剂系统提取,比较各提取物的抗氧化能力,通过小鼠CCl4急性肝损伤模型实验评价具备抗氧化活性提取物的保肝效果;以对大鼠肝匀浆抗脂质过氧化保护作用为评价标准,采用大孔树脂及固相萃取技术对仙草抗氧化活性成分进行分离纯化,采用紫外、红外、HPLC-NMR等仪器分析方法对活性成分的初步分子结构组成及其理化性质进行解析,研究表明:
1.仙草不同极性提取物对羟自由基和超氧阴离子都有一定的清除作用,其中水提物及醇提物的清除作用较强,在大鼠离体肝脏抗氧化实验中,仅水提物有较强的抗脂质过氧化作用,可以有效降抑制脂质过氧化产物MDA生成,水提物和醇提物均能一定程度提高GSH-PX活性,但是各提取物对SOD活力影响不显著,综合多种抗氧化体系提示仙草水提物及醇提物具备一定的抗氧化活性;
2.选择具有抗氧化活性的仙草水提物及醇提物,采用CCl4急性肝损伤模型探讨其对小鼠肝脏的保护作用,结果显示仙草水提物低、中、高剂量组与模型对照组相比均能显著的降低ALT(P<0.05)、AST、TG值(P<0.01),显著增加Alb含量(P<0.05),能极显著降低小鼠肝组织匀浆MDA值(P<0.01),极显著升高GSH、GSH-PX值(P<0.01),对SOD酶活性无显著影响(P>0.05),同时,仙草水提物低、中、高剂量组与联苯双酯阳性对照组相比各指标无显著差异(P>0.05),而仙草醇提物与模型对照组相比上述各生化指标无显著差异(P>0.05),表明仙草水提物对CCl4所致的小鼠肝损伤具有一定保护作用,醇提物没有明显效果;
3.以对大鼠肝匀浆脂质过氧化水平的保护作用为标准,对仙草热提物抗脂质过氧化活性成分进行分离纯化,经大孔树脂S-8,获得抗脂质过氧化较强组分F3,其MDA抑制率由37.25%提高到64.79%,经化学成分预测、UV检测表明其中含有黄酮、多酚类物质,对F3进行硅胶固相萃取,获得对MDA抑制率达到88.63%的强抗脂质过氧化组分F3-3,经UV推测可能为黄酮醇类化合物,IR示意有羟基(-OH)、黄酮骨架羰基峰(-C=O)、苯环、芳香醚等特征吸收峰存在,经HPLC-MS鉴定,表明有效成分属于以槲皮素为甙元的黄酮醇类化合物,推测异槲皮甙及槲皮甙为其中强抗脂质过氧化活性有效成分。