研究背景:良性前列腺增生在当下已经成为中老年男性泌尿系统中的常见病,随着我国人口老龄化高潮的到来,其发病率逐年攀升,影响着中老年男性健康及生活质量水平。良性前列腺增生从微观上表现为前列腺上皮和间质细胞过度增殖,宏观上表现为膀胱出口和前列腺尿道部发生梗阻性病变,临床上会出现膀胱尿液流出梗塞等症状。其发病风险随着年龄增长而增加,50岁以上中老年男性有六成患有该病,而到了80岁时老年男性的发病率则达到惊人的83%。不仅年龄因素与良性前列腺增生密切相关,雄激素也通常被认为与其产生有关,人体内的5α-还原酶可将睾酮5α处的双键还原产生双氢睾酮,双氢睾酮作为人体内主要的雄激素,其含量的升高与良性前列腺增生的发生息息相关,临床上据此用抑制5α-还原酶的药物减少双氢睾酮的含量来治疗良性前列腺增生。过去几十年针对良性前列腺增生的手术及药物治疗取得了很大进展,多样化的治疗给患者带来曙光的同时也都存在一定的副作用,尿道前列腺切除术等手术治疗会带来诸如尿道狭窄及勃起功能障碍等一些并发症,α1受体阻滞剂会引起低血压及头痛等副作用,5α-还原酶抑制剂会产生勃起功能障碍及非勃起功能障碍性性功能障碍的不良反应,因此寻找一种既能有效治疗良性前列腺增生又副作用轻微且少的药物便成为了目前该领域的主要热点。由于植物类药物具有来自大自然、毒副作用小且性质温和等其他药物无法取代的优点,因此我们将视线转移到了植物类药物上。Pao Pereira提取物是一种从亚马孙雨林夹竹桃科树木的树皮中提取的草药制剂,其富含包括flavopereirine在内的多种生物碱,之前研究表明flavopereirine亲脂性好,具有良好的侵入细胞膜在细胞内发挥作用的能力,同时其总极性表面积小,具有良好的转运能力,该提取物能够诱导前列腺癌细胞凋亡,其抑制前列腺癌细胞增殖的出色表现引起了我们对于其是否能够用于治疗良性前列腺增生的好奇心,因此我们研究了该提取物在睾酮诱导的良性前列腺增生大鼠模型中对良性前列腺增生的治疗潜力及其在治疗过程中的安全性,并探讨了其治疗作用机理。研究方法:将20只SD雄性大鼠随机分为两组:5只正常对照组大鼠和15只造模手术组大鼠。造模手术组经戊巴比妥钠麻醉后手术阴囊摘取睾丸去势处理,正常对照组假手术处理。造模组随机分为3组,阴性对照组、非那雄胺组和Pao Pereira提取物处理组,通过给予造模组阉割大鼠每天皮下注射丙酸睾酮5 mg/kg处理构建良性前列腺增生大鼠模型,每日用灌胃器给正常对照组和阴性对照组灌胃等量的蒸馏水,非那雄胺组和Pao Pereira提取物处理组每日同时灌胃给药治疗。所有大鼠在第29天处死并称量体重,解剖收集前列腺拍照并称重,记录前列腺大小、湿重和前列腺指数,验证Pao Pereira提取物对于良性前列腺增生的治疗效果。再通过精子实验验证该提取物的副作用大小。为了证明Pao Pereira提取物对于前列腺细胞的增殖抑制作用,通过组织学染色观察前列腺上皮细胞厚度及管腔面积变化,同时免疫组化染色检测增殖抗原的变化。为了验证它能否抑制雄激素受体相关通路,我们通过免疫组化检测雄激素受体,同时蛋白质印迹验证雄激素受体及5α-还原酶的蛋白表达水平变化。体内实验验证完此提取物的治疗效果后,接着便继续验证它能否在体外发挥作用,通过MTT实验验证该提取物能否抑制RWPE-1细胞的增殖,为了进一步探究它是如何抑制增殖,通过流式分析细胞周期变化,最后通过蛋白质印迹进一步检验该提取物能否抑制RWPE-1细胞中5α-还原酶和雄激素受体的表达。研究结果:相较于正常对照组,阴性对照组大鼠前列腺肥大,我们成功构建大鼠BPH模型。与阴性对照组相比,非那雄胺组及Pao Pereira提取物处理组的前列腺重量有明显下降。值得注意的是,提取物处理组与正常对照组的大鼠的体重和精子数量几乎无差异。此外,Pao Pereira提取物显著降低了前列腺指数和前列腺上皮细胞厚度,同时使管腔面积增大,其治疗效果与非那雄胺处理组相差无几。免疫组化结果显示,经该提取物处理后增殖抗原水平明显下降。它会使睾酮诱导的雄性激素受体表达水平以及雄激素相关蛋白如5α-还原酶的表达水平皆下降。体外实验结果显示Pao Pereira提取物能抑制RWPE-1细胞增殖,同时降低5α-还原酶、雄性激素受体及其靶蛋白PSA的表达水平。研究结论:Pao Pereira提取物可以使大鼠的前列腺和RWPE-1细胞的增殖受到抑制,在大鼠体内通过抑制5α-还原酶和雄激素受体来抑制睾酮诱导的良性前列腺增生的发展,同时对大鼠体重和精子数量几乎无影响,与此同时还能够诱导RWPE-1细胞周期阻滞。这提示Pao Pereira提取物可能是治疗良性前列腺增生的相对安全且有希望的候选药物,其临床试验和人体安全性有待进一步研究。