论文部分内容阅读
背景:血管平滑肌细胞的电压门控L型钙通道(L-type calcium channels,LTCC)Ca V1.2的激活引起Ca2+内流,对维持血管肌源性张力和血压起着至关重要的作用。可变剪接作为一种转录后调控机制,它可以调控Ca V1.2钙通道产生不同的外显子拼接来发挥精细调控通道的功能。Rbfox2是一种剪接调控因子,在神经发育的过程中它可以调控Ca V1.2前体m RNA的可变剪接事件。但是,Rbfox2在调控血管Ca V1.2通道的功能以及在高血压中的作用及机制尚不清楚。目的:探索高血压血管中Rbfox2及Ca V1.2的exon 9*和exon 33的表达是否改变,研究Rbfox2对Ca V1.2的exon 9*和exon 33的调控作用,及对Ca V1.2钙通道功能和血管肌源性张力的影响。方法:分别利用克隆RT-PCR和Western blotting技术检测大鼠肠系膜动脉含exon 9*和exon 33的Ca V1.2钙通道m RNA以及Rbfox2蛋白的表达水平。在细胞水平,使用si RNA敲降Rbfox2后,检测对exon 9*和exon 33的调控作用,并用全细胞膜片钳技术检测Rbfox2对Ca V1.2钙通道电生理特性的影响。利用微血管张力检测系统,检测Rbfox2对肠系膜动脉肌源性血管张力的影响。结果:在高血压大鼠的肠系膜动脉中,含exon 9*的Ca V1.2钙通道升高10.3%,而含exon 33的Ca V1.2钙通道降低了10.5%。由于负性调控型Rbfox2(dominantnegative isoform,DN Rbfox2)升高,高血压动脉中Rbfox2总蛋白的表达水平增加约3倍。在血管平滑肌细胞中,我们发现敲降Rbfox2可以增加含exon 9*的Ca V1.2钙通道表达水平,同时降低含exon 33的Ca V1.2钙通道表达水平。通过全细胞膜片钳,发现减少Rbfox2可以使血管的Ca V1.2钙通道的稳态激活(steady-state activation,SSA)和稳态失活(steady-state inactivation,SSI)曲线向超极化的方向移动,这导致钙窗电流转向更负的膜电位,使得通道更易打开。此外,敲降大鼠肠系膜动脉中Rbfox2后,还会增加由压力诱导的血管肌源性张力。结论:Rbfox2通过动态调控exon 9*和exon 33的表达来调节血管的Ca V1.2钙离子通道的功能,从而影响血管肌源性张力。因此我们的研究阐明了在高血压动脉中Ca V1.2钙离子通道的功能上调的分子机制,并为临床治疗高血压提供一个潜在的靶点。