共信号分子B7-H3与结直肠癌侵袭相关性的初步研究

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目的:共信号分子B7-H3作为重要的免疫分子,在结直肠癌的发生发展过程中发挥关键作用。结直肠癌多伴随肝转移,研究证明其与基质金属蛋白酶(MMPs)相关。有文献报道:在结直肠癌的患者中常伴有B7-H3的异常表达,且和预后呈负相关关系。本论文拟从B7-H3的非免疫学功能的角度,以结直肠癌肿瘤标本和结直肠癌细胞株SW480为研究对象,分析结直肠癌中B7-H3和MMPs家族成员MMP2. MMP9表达水平的相关关系,研究B7-H3对结肠癌细胞侵袭能力的调控作用。方法:1、利用免疫组化方法对87例结直肠癌标本进行B7-H3、MMP2和MMP9染色,并按表达强弱进行评分,分别为阴性0,弱阳性1+,阳性2+,强阳性3+。2、构建人B7-H3全长基因重组表达载体,并转染SW480,经筛选、Real-time PCR、 Western Blot、激光共聚焦等方法验证,构建高表达B7-H3的结直肠癌细胞SW480稳定株。3、瞬时转染B7-H3siRNA片段,建立SW480-B7-H3+kd敲减模型;B7-H3高表达或干扰后,Western Blot检测MMP2和MMP9的表达,Transwell分析细胞的侵袭能力。结果:1、结直肠癌患者肿瘤中B7-H3的表达与TNM分期的T分期有关,与N分期无关;B7-H3的表达与MMP2、MMP9呈正相关,特别与MMP9具有较好的线性关系。2、成功构建SW480稳转对照株和高表达B7-H3的SW480稳转株,分别命名为SW480-NC和SW480-B7-H3。3、成功构建B7-H3敲减细胞株,命名为SW480-B7-H3+kd; B7-H3高表达后,MMP2和MMP9的表达水平升高,细胞侵袭能力显著增强;反之,B7-H3表达被干扰后,MMP2和MMP9的表达降低,细胞侵袭能力随之减弱。结论:1、结直肠癌组织中B7-H3的表达与肿瘤侵袭深度有关,与区域淋巴结转移无关,且与基质金属蛋白酶MMP2和MMP9关系密切。2、建立稳转细胞株后,可对B7-H3在结直肠癌中发挥的生物学功能及其参与的信号通路进行深入的研究。3、结直肠癌细胞中高表达的B7-H3可以上调细胞侵袭相关的金属蛋白酶的表达,促进肿瘤细胞的侵袭和转移。综上所述,本论文从细胞和组织水平上证实,结直肠癌中B7-H3的表达与基质金属蛋白酶的表达呈正相关,促进肿瘤细胞的侵袭和转移。构建的高表达B7-H3的结直肠癌稳转株SW480-B7-H3已成为重要的实验工具,为进一步研究B7-H3的其他生物学功能奠定扎实的基础。
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