论文部分内容阅读
第一部分结肠癌患者血清差异表达miRNAs的初步筛选目的:通过芯片初步筛选结肠癌患者血清中差异表达的miRNAs。方法:采用中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所开发的miRNA Uni Tag?微阵列芯片,检测3例结肠癌患者血清样本和3例健康对照血清中miRNAs的表达情况,分析结肠癌血清中差异表达的miRNAs。结果:miRNA Uni Tag?微阵列芯片杂交结果显示,根据改变倍数≧1.5且P值<0.05筛选在结肠癌患者血清中差异表达的miRNAs。结肠癌患者共有87种血清miRNAs差异表达,其中上调表达有39个,下调表达有48个。结论:成功筛选出结肠癌患者血清中差异表达miRNAs。第二部分初步评价血清miRNA表达谱在结肠癌诊断和预后判断中的作用目的:初步探讨血清miRNA表达谱在结肠癌诊断和预后判断中的作用。方法:(1)采用Real-time PCR对芯片中差异表达最明显(表达变化前5位)的miRNAs在训练集(40例结肠癌患者vs.40例正常对照)和验证集(60例结肠癌患者vs.60例正常对照)中进行验证,构建结肠癌血清miRNA表达谱。(2)对血清miRNA表达谱在结肠癌中的诊断价值进行评估,对结肠癌患者不同病理参数下miRNA表达谱的表达变化进行分析。观察血清miRNA表达谱在结肠癌术前和术后的表达变化。(3)绘制生存曲线,初步研究血清miRNA表达谱在判断结肠癌预后中的作用。结果:(1)Real-time PCR对芯片中差异表达最明显(表达变化前5位)的miRNAs在训练集和验证集中进行验证。结果显示miR-31、miR-141-5p、miR-224-3p、miR-576-5p、miR-4669这5个miRNA在结肠癌患者血清表达变化与正常对照组相比有显著性差异(P<0.05)。miR-31、miR-141-5p、miR-224-3p、miR-576-5p在结肠癌血清中表达增高,miR-4669在结肠癌血清中表达下降。(2)这5个miRNA均具有一定的区分结肠癌患者和正常人群的能力。5个miRNA联合组成的miRNA表达谱在诊断结肠癌方面比单个miRNA的诊断效能更高。随着结肠癌分化程度的降低,miR-31、miR-141-5p、miR-224-3p、miR-576-5p的表达升高。miR-31、miR-141-5p、miR-224-3p、miR-576-5p的表达随着结肠癌TNM分期进展而增高,miR-4669的表达则正好相反。伴淋巴结转移组中血清miR-31、miR-141-5p、miR-224-3p、miR-576-5p的表达增高,而miR-4669的表达降低。miR-31、miR-141-5p、miR-224-3p、miR-576-5p在手术切除结肠癌病灶后血清表达水平显著下降。(3)miR-31、miR-141-5p、miR-224-3p、miR-576-5p表达高于临界值时提示结肠癌生存期较短,miR-4669表达低于临界值时提示结肠癌生存期较短。结论:血清miRNA表达谱对结肠癌具有较好的诊断效能,并与结肠癌患者预后相关。血清miRNA表达谱有望成为诊断结肠癌及判断结肠癌预后的潜在肿瘤标志物。第三部分结肠癌血清miRNA表达谱生物信息分析目的:通过生物信息学的分析方法,为研究血清miRNAs在结肠癌发生发展中的分子机制提供依据。方法:使用3个数据库(miRanda,Targetscan,miRdb)对结肠癌血清miRNA表达谱进行生物信息分析,预测5个目标miRNA(miR-31、miR-141-5p、miR-224-3p、miR-576-5p、miR-4669)的靶基因,对获得的交集靶基因进行GO-Analysis功能分析和Pathway-Analysis信号通路分析。结果:(1)miRanda,Targetscan与miRdb数据库预测血清miRNA表达谱的交集靶基因数量为1997个。(2)血清miRNA表达谱的交集靶基因GO-Analysis显著性功能与泛素-蛋白酶体系统密切相关。KEGG Pathway信号通路分析显著富集于丝裂原活化蛋白激酶信号通路、泛素介导的蛋白水解通路、Erb B信号通路。结论:生物信息学分析显示,血清miRNA表达谱及其靶基因涉及结肠癌发生发展的调控,可能在结肠癌发生发展中发挥重要作用。