【摘 要】
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真菌引起的果蔬腐烂不仅会导致巨大的经济损失,而且会产生真菌毒素而影响食用者的健康。在果蔬的采收、加工、运输和储存过程中,因其容易受到机械损伤而导致各种病原菌的侵染。化学杀菌剂通常被用来控制果蔬菜采前和采后的病害,然而,其会影响人类健康和环境。此外,杀菌剂的频繁使用也可能使菌株产生抗药性,从而使采前和采后病害的防治更加困难。因此,亟需一种环境友好型的方法对果蔬采前和采后病害进行控制,而利用拮抗微生物
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真菌引起的果蔬腐烂不仅会导致巨大的经济损失,而且会产生真菌毒素而影响食用者的健康。在果蔬的采收、加工、运输和储存过程中,因其容易受到机械损伤而导致各种病原菌的侵染。化学杀菌剂通常被用来控制果蔬菜采前和采后的病害,然而,其会影响人类健康和环境。此外,杀菌剂的频繁使用也可能使菌株产生抗药性,从而使采前和采后病害的防治更加困难。因此,亟需一种环境友好型的方法对果蔬采前和采后病害进行控制,而利用拮抗微生物抑制真菌并控制其在果蔬中的病害传播是一种非常有前景的方法。胶红酵母（Rhodotorula mucilaginosa）是我们课题组筛选分离的一株拮抗酵母菌,前期的研究表明,R.mucilaginosa对苹果、草莓、桃果等水果的采后病害具有较强的控制效果,但其对柑桔采后病害的控制尚没有文献报道。另外,拮抗微生物（包括拮抗酵母）的可靠性或有效性往往受到环境因素的影响,导致拮抗生物制剂对采后病害的防治效力不如化学合成杀菌剂显著。因此怎样提高酵母的生防效力成为了亟需解决的问题。与天然植物激素结合使用是提高拮抗酵母生防效力的关键措施之一。水杨酸（Salicylic acid,SA）是一种酚类化合物,有报道表明其可以参与调节植物生长发育和促进抗病性。本文研究了SA对提高胶红酵母（Rhodotorula mucilaginosa）防治柑桔果实绿霉病生防效力的影响,并从生理、分子两个层面研究SA提高R.mucilaginosa对柑橘采后绿霉病防治效力的机制。论文的研究工作和主要结论如下:1.水杨酸提高了胶红酵母对柑桔采后绿霉病及自然腐烂的防治效力0.2 m M SA及R.mucilaginosa单独使用,均能显著降低由指状青霉（Penicillium digitatum）引起的柑桔绿霉病的发病率及病斑直径;两者结合使用,其对柑桔绿霉病的控制效果好于两者单独使用的效果。将0.2 m M的SA溶液及1×108 cells/m L R.mucilaginosa菌悬液单独使用,以及两者结合使用制备的含SA的R.mucilaginosa菌悬液,分别喷洒到柑桔的表面,风干后置于20℃条件下贮藏30 d。三种处理对柑桔果实的感观性状均无明显影响,但都能显著抑制柑桔果实的自然发病率,且两者结合使用的抑制效果最好。孢子萌发的试验结果表明,SA及R.mucilaginosa单独使用均可对P.digitatum孢子萌发及菌丝延伸产生一定影响,两者结合使用,其对P.digitatum孢子萌发及菌丝延伸的控制效果更好。2.水杨酸提高胶红酵母防治柑桔采后病害效力的物理及生理机制研究SA通过诱导R.mucilaginosa在柑桔伤口处吸收营养物质,从而提高酵母的生存能力,并对P.digitatum具有良好的抑制效果。扫描电镜结果表明,无论添加或不添加0.2m M SA,R.mucilaginosa均能有效地寄生在真菌菌丝体上,从而抑制果实采后绿霉病的扩增。SA能增强R.mucilaginosa在柑桔伤口处的定殖能力,直接与P.digitatum竞争营养物质;增强R.mucilaginosa诱导柑桔抗病相关酶的活力,从而抑制病原菌的生长。另外,添加或不添加0.2 m M SA的R.mucilaginosa均能提高柑桔果实木质素含量、活性成分和抗氧化活性,从而抑制绿霉病的发生,而添加SA的R.mucilaginosa提高效果更好。添加或不添加0.2 m M SA的R.mucilaginosa处理的柑桔果实的p H值改变均影响了伤口部位P.digitatum的致病力,而添加SA的R.mucilaginosa处理影响效果更好。3.水杨酸结合胶红酵母对柑桔果实基因表达的影响用转录组测序（RNA-seq）的方法对接种SA结合R.mucilaginosa处理的柑桔果实以及R.mucilaginosa单独处理的柑桔果实的防御应答差异表达基因进行了研究。结果表明,经0.2 m M SA结合R.mucilaginosa处理的柑桔果实,与R.mucilaginosa单独处理的果实相比较,有46个基因显著差异表达;SA结合R.mucilaginosa处理诱导了柑桔果实中与防御、氧化应激和免疫系统响应相关的差异基因的上调表达。此外,通过实时定量PCR（RT-q PCR）在转录水平上对0.2 m M SA结合R.mucilaginosa处理的柑桔果实与R.mucilaginosa单独处理的柑桔果实抗病性相关的基因表达水平进行了研究,结果表明,0.2 m M SA结合R.mucilaginosa处理可提高柑桔果实的抗病性。
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