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背景和目的斑秃(alopecia areata,AA)是一种突然发生的局限性无瘢痕性脱发,局部皮肤一般正常。斑秃影响人的身心健康,可能是部分人群焦虑、抑郁的重要影响因素之一。目前斑秃的病因尚不十分清楚,有研究认为个体遗传因素导致主要CD8驱使的Th1细胞自身免疫反应攻击毛囊,导致毛囊受损。最新研究数据显示调节性T细胞、γδ调节T细胞、NKT10细胞和毛囊周围肥大细胞等调节淋巴细胞亚群维持毛囊的生理免疫赦免(immune privilege,IP),CD8+T细胞、NK细胞亚群和所谓的“非传统”T细胞(不变的NKT细胞、γδT细胞、经典NK细胞、1型先天淋巴样细胞)产生了大量IFN-γ从而使毛囊免疫赦免崩溃、驱动了免疫反应使毛囊受损。调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)在控制过敏、自身免疫反应、炎症、肿瘤免疫等免疫反应中发挥着重要的作用,并且能促进毛发的生长,其中CD39+Tregs比CD39-Tregs抑制传统效应T细胞增殖和分泌细胞因子的能力更强。虽然近些年陆续有关于斑秃患者外周血中Tregs占CD4+T细胞比例检测的研究,但很少有人检测斑秃患者外周血中Tregs绝对值,并且有些研究结果相互矛盾。而对于斑秃患者外周血中CD39+Tregs水平的检测报道甚少,因此我们对斑秃患者外周血中Tregs/CD4+T细胞、CD39+Tregs/Tregs 比例进行检测,还检测了 Tregs、CD39+Tregs的绝对值,旨在对斑秃的免疫发病机理进行验证和补充。白介素2(interleukin-2,IL-2)通过刺激CD4+T细胞和CD8+T细胞的增值和分化来参与免疫应答的诱导,人类Tregs具有依赖于IL-2的转录扩增机制,即使是低剂量的IL-2也能选择性的激活Tregs参与免疫调节。既往报道认为斑秃患者外周血IL-2浓度升高,但是有人使用低剂量IL-2皮下注射通过促进Tregs的募集治疗重症斑秃,这似乎有些矛盾,相关研究也比较少,且很少有研究对斑秃中IL-2和CD39+Tregs的相关性进行分析。本实验通过对斑秃和健康人外周血CD3 9+Tregs、IL-2水平进行检测并分析了两者之间的相关性,探讨CD39+Tregs、IL-2在斑秃发病的病理机制中的作用,以丰富Tregs、IL-2在斑秃发病机制方面的相关研究。材料和方法1材料纳入本研究实验组的23例患者均来自郑州大学第一附属医院皮肤科门诊。均具备确诊、完整的门诊病例资料并排除其他的免疫性疾病、感染,年龄16-47岁,平均为30.71±4.46岁,男性15例,女性8例。单灶性斑秃9例、多灶性斑秃8例,弥漫性斑秃4例,匍匐性斑秃1例,普秃1例。纳入对照组的21例与实验组年龄性别相匹配的健康入来自郑州大学第一附属医院体检科。2方法对实验组和对照组各留取空腹血5ml,然后用美国贝克曼公司流式细胞仪全自动分析软件测定 CD4+CD25+Tregs、CD4+CD25+CD127-Tregs、CD4+CD25+CD127-CD39+Tregs的百分比和绝对值、IL-2的浓度,并用kaluza software和FlowJo对得出的数据进行分析。3统计学处理对实验所得的数据采用SPSS21.0软件进行统计学处理。正态分布的计量资料用均数±标志差(X±S)表示,行两独立样本t检验(方差不齐的用t’检验);不满足正态的用中位数(25%分位数,75%分位数)[M(P25,P75)]表示,用非参数检验,P<0.05时差异有统计学意义,用spearman检验进行相关分析,作图用GraphPad Prism8.0.2。结果1.斑秃患者外周血中CD4+CD25+Tregs的绝对值为64.06±28.91/μl,健康对照组为33.76±15.20/μl,斑秃外周血中CD4+CD25+Tregs绝对值明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);斑秃患者外周血中CD4+CD25+Tregs/CD4+T细胞百分比为8.46(5.3,8.46)%,健康对照组为5.57(4.9,8.29)%,斑秃患者的外周血中CD4+CD25+Tregs/CD4+T细胞比例高于健康对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。2.斑秃患者外周血中CD4+CD25+CD127-Tregs绝对值55.89(43.73,94.07)/μl,健康对照组为 33.80(19.68,47.84)/μl,斑秃患者外周血中 CD4+CD25+CD127-Tregs绝对值明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);斑秃患者的外周血中 CD4+CD25+CD127-Tregs/CD4+T细胞比例为 6.79(5.09,9.00)%,健康对照组为6.12(4.13,6.78)%,斑秃外周血 CD4+CD25+CD127-Tregs/CD4+T 细胞比例高于健康对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。3.在斑秃患者的外周血中CD4+CD25+Tregs和CD4+CD25+CD127-Tregs的绝对值强相关(r=0.924,P<0.05),在健康对照组中也存在强相关(r=0.933,P<0.05);在斑秃患者外周血中CD4+CD25+CD127Tregs/CD4+T细胞的比例和CD4+CD25+CD127-Tregs/CD4+T 细胞比例存在强相关(r=0.855,P<0.05),在健康对照组中也存在强相关(r=7.06,P<0.05)。4.斑秃患者外周血中CD4+CD25+CD127-CD39+Tregs的绝对值为20.03(15.72,32.23)/μl,健康对照组为8.19(5.78,12.78)/μl,差异有统计学意义(P<0.05);斑秃患者外周血中 CD4+CD25+CD127-CD39+Tregs 占 CD4+CD25+CD127-Tregs 的比例为44.07(19.58,62.90)%,健康对照组为23.36(14.96,47.73)%,斑秃患者的外周血中CD4+CD25+CD127-CD39+Tregs比例高于健康对照组,但无统计学意义(P>0.05)。5.斑秃患者的血浆中IL-2的浓度为0.45(0.38,0.65)pg/ml,健康对照组为0.47(0.38,0.65)pg/ml,斑秃患者血浆中IL-2的浓度低于健康对照组,差异无统计学意义(P>0.05),斑秃患者血浆中IL-2浓度与CD39+Tregs绝对值呈负相关(r=-0.72,P<0.05)。结论1.斑秃患者外周血中Tregs、CD39+Tregs绝对值明显升高,提示Tregs、CD39+Tregs参与了调节斑秃的免疫炎症过程;2.斑秃患者外周血中CD39+Tregs与血浆中IL-2的浓度呈负相关,表明二者在斑秃的发病中相互调节,共同参与斑秃的免疫反应。