生物柴油是由动植物油脂(主要为甘油三酯)与短链醇类发生酯交换反应而生成的脂肪酸酯,是一种可以再生且环保的生物能源。随着能源危机的加剧,其越来越受到关注。脂肪酶由于其催化合成生物柴油的条件温和,容易操作,无污染的特点而得到广泛研究。但是,游离脂肪酶价格昂贵,不易分离和稳定性差的缺点也制约了它的发展。本研究旨在改善脂肪酶的应用限制,采用吸附和交联方法联用的方法固定化脂肪酶Candida sp.99-125,并用于催化合成生物柴油的反应。对固定化酶的吸附过程中各种因素进行了优化并得到了最佳条件,吸附过程：载体为D311树脂,脂肪酶质量为0.25 g,充分溶解在5mL50mMpH 8.0的磷酸缓冲溶液中,加入0.25 g载体,在35℃的温度下,吸附4 h。交联固定化时,采用先吸附后交联的方式,吸附完成后在酶液中加入等体积的交联剂。对交联剂戊二醛和京尼平的交联条件进行优化,得到戊二醛和京尼平的最优的浓度分别为0.1%(w/v)和0.25%(w/v),交联时间为2 h和4 h,交联温度为20℃C和30℃。考察了固定化酶的酶学性能,热稳定性相对于游离酶明显提高,储存稳定性表现良好。把固定化酶用于催化月桂酸和正辛醇的反应,连续反应40批后酶活基本保持不变。用多种表征手段进行了树脂和酶的表征。可以看到树脂成规整圆形,截面内部孔道发达,孔的直径都在100 nm以上,树脂表面和截面有丰富的氨基。脂肪酶成功的固定到了树脂上并且在树脂表面和孔道内部均匀分布。优化了生物柴油的合成工艺,催化地沟油生产生物柴油单批转化率达到93%以上,连续反应13批,酶活还能保持在70%以上。