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目的:采用蛋白质组学联合代谢组学技术,考察朝医方“千金文武汤”(Qian-Jin-Wen-Wu Decoction,QWD)对大鼠糖尿病肾病(DKD)模型的干预结果,初步阐明QWD治疗DKD的作用机制及作用靶点。方法:1.建立以链脲佐菌素诱导的DKD大鼠模型,后给予模型动物QWD药物,观测其表观体态,并测定生化指标,评价主要药效作用。2.采用尿素法提取大鼠肾脏组织中的蛋白质,对其进行定量蛋白质组学(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)标记后置于液质联用仪(liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS)生成质谱检测原始文件;设置B-vs-BD、B-vs-M、M-vs-MD三个对比组,对质谱检测得到的原始数据进行生信分析,确定差异蛋白,进行差异蛋白的聚类分析,样品间的相关性分析,基于基因功能国际标准分类体系(Gene Ontology,GO)的分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)的分析,差异蛋白相互间的作用(protein-proteininternet,PPI)的分析。3.取大鼠肾脏组织处理后,通过LC-MS分别在正离子和负离子模式下检测分析代谢物;设置B-vs-BD、B-vs-M、M-vs-MD三个对比组,对代谢物进行定性和定量分析;进行数据质控,数据归一化,单变量统计分析,多元变量统计分析,并进行差异代谢物在代谢通路上的注释以及富集分析。4.对蛋白质组学和代谢组学实验数据结果进行双组学的联合分析,发现符合酶-代谢物联系的关系对,并构建网络。结果:1.给药后大鼠一般指标及生化指标均表现出差异,且数据具有统计学意义。2.蛋白质组学实验后数据结果显示,B-vs-BD组发现显著上调蛋白4个,显著下调蛋白58个;B-vs-M组发现显著上调蛋白21个,显著下调蛋白26个;M-vs-MD组发现显著上调蛋白5个,显著下调蛋白14个。GO,Pathway对差异蛋白的功能注释、富集分析结果说明,QWD主要通过调节神经系统、泌尿系统、消化系统、内分泌系统,影响了异生素生物降解和新陈代谢、氨基酸代谢、脂质代谢、能量代谢、碳水化合物等代谢过程,对DKD起到治疗作用。差异蛋白互作网络结果显示,Krtl0、Krt8、Krt19等可作为QWD治疗DKD的靶蛋白;DKD发病的生物学机制与细胞内的线粒体氧化磷酸化通路有关。3.代谢组学实验显示,在正离子模式下可检测到的总化合物数为1666个,筛选保留1137个,在负离子模式下可检测到的化合物数为1803个,筛选保留789个;差异代谢物的代谢通路注释和富集分析结果表明,QWD能够调节α亚麻酸和亚油酸代谢、甘油脂代谢、糖酵解、淀粉和蔗糖代谢、果糖和甘露糖降解、糖异生、warburg效应,还参与甘氨酸和丝氨酸代谢相关以及嘌呤的代谢。4.将蛋白数据同源到人后,B-vs-BD组、B-vs-M组和M-vs-MD组各发现酶-代谢物共表达关系对1对、6对和2对,其中发现B-vs-M组和M-vs-MD组中出现相同的代谢物testosterone,B-vs-M组和B-vs-BD组中出现相同的酶ALDHIB1。上述结果提示QWD干预DKD作用的分子机制可能是通过缓解细胞线粒体氧化磷酸化功能障碍,增强机体多种代谢途径,从而修复肾脏组织恢复细胞功能。结论:本文成功建立了 QWD干预DKD的动物模型,初步阐明QWD对肾脏组织和功能调节及修复的机制,研究结果为QWD后续成药性研究提了供实验依据和研究思路。