目的研究正常新生儿出生后14天内的肠道菌群变化规律,探讨孕晚期孕妇服用益生菌对新生儿出生后14天内肠道菌群建立的影响,为正常妊娠期添加益生菌的合理性提供临床依据。方法1.筛选在暨南大学附属第一医院系统产检并经阴道分娩,符合纳入及排除标准的孕妇共25人,分组为益生菌组10人,对照组15人,在孕32周前签署知情同意书后纳入本研究,随访到新生儿出生后14天。2.收集新生儿出生第1次胎粪及第3天、第14天粪便标本,基于16S r RNA基因测序技术对新生儿肠道菌群的丰度及构成、alpha多样性、beta多样性、网络图等进行综合评价。结果1.新生儿肠道菌群物种组成分析:(1)与第1次胎粪相比,对照组及益生菌组第3天变形菌门相对丰度均显著下降(从50.0%到21.0%,66.8%到24.6%),而厚壁菌门相对丰度均显著上升(33.2%到56.3%,25.1%到42.4%),厚壁菌门取代了变形菌门的优势地位;(2)两组新生儿第3天与第14天粪便主要菌门的相对丰度保持相对稳定。同时期的益生菌组与对照组新生儿肠道丰度前3位菌门比较差异均无统计学意义(P>0.05)。2.新生儿肠道菌群α多样性分析:simpson指数比较显示(1)对照组肠道菌群α多样性在第3天发生骤减,而且分别与第1次胎粪、第14天粪便比较,差异均有显著统计学意义(P=0.00),说明对照组正常新生儿14天内肠道菌群的α多样性先降低后上升。(2)益生菌组3个时期肠道菌群相比均无统计学意义,说明孕晚期服用三联菌能明显增加第3天粪便菌群的α多样性。3.新生儿肠道菌群β多样性分析:PCo A结果显示(1)同组别的3个时期菌群两两比较,第1次胎粪分别与第3天及第14天肠道菌群均远远分开,无聚类部分,群落差异很大,但第3天与第14天肠道菌群几乎重叠,群落结构相似性极高,说明新生儿肠道菌群β多样性在出生后第3天骤减,骤减后到第14天无明显变化。(2)同时期益生菌组和对照组两两比较,第1次胎粪聚类部分小于1/2,群落差异相对大,但无论是第3天还是第14天肠道菌群都发现明显聚类,群落结构相似性极高。表明孕晚期服用三联菌仅能改变第1次胎粪的β多样性,不能改变新生儿第3天及第14天粪便菌群的β多样性。4.同时期新生儿益生菌组及对照组显著差异物种的比较:第1次胎粪益生菌组与对照组比较,益生菌组有4个物种丰度显著降低,分别是clostridia、clostridiales、lachnospiraceae、Romboutsia,这4个差异物种有亲密进化关系。第3天及第14天新生儿肠道菌群物种在两组间无显著差异。5.各组新生儿丰度前100菌属相关性网络图:(1)随着新生儿日龄的增长,两组网络图越来越疏松,表明出生后14天内肠道相互密切联系的菌属逐渐减少,整体菌属之间显著相关关系逐渐减低。(2)同时期益生菌组与对照组比较,每个时期益生菌组均较对照组网络图更疏散,而且网络图连线的菌属数量也较对照组少,表明孕晚期服用三联菌后能降低新生儿整体肠道菌属之间显著相关关系。6.新生儿肠道内三种益生菌与其他菌属之间显著相关关系分析:(1)虽然对照组双歧杆菌及链球菌出生第3天后丰度开始增加了(从0.6%到14.6%,从0.9%到7.8%),但是与其他菌属显著相关个数均发生骤减(从18个到1个,从37个到12个)。(2)出生时第一次胎粪对照组的双歧杆菌、链球菌与其他菌属显著相关个数均比益生菌组的多,而乳杆菌相关个数较益生菌组少;出生第3天及第14天益生菌组与对照组比较,三种益生菌显著相关个数无明显差异。表明孕期添加三联菌能让胎儿在宫内时肠道双歧杆菌、链球菌与其他菌属显著相关关系更快向第3天肠道菌群靠近。结论1.正常新生儿生后14天内肠道菌群α多样性先降低后上升,β多样性在出生后第3天骤减,骤减后到14天无明显变化,肠道内菌属之间显著相关关系随新生儿日龄增长而降低。2.孕晚期服用三联菌增加新生儿第3天肠道菌群的α多样性,降低新生儿第1天肠道菌群的β多样性,降低菌属之间显著相关关系。