SATB1-shRNA下调Bc12表达诱导A549细胞凋亡

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jcfasd123
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目的:应用RNAi干扰技术干扰肺癌A549细胞株中特异性AT序列结合蛋白-1(Special AT-rich sequence-binding protein-1,SATB1)基因的表达,探讨其对A549细胞凋亡的影响。方法:设计合成针对SATB1基因的shRNA表达质粒(SATB1-shRNA)。采用阳离子脂质体法将SATB1-shRNA转染入肺癌A549细胞。分别采用RT-PCR、Western-Blot法检测SATB1-shRNA转染A549细胞中SATB1、Bcl2、BAX及Caspase-3的表达。FCM检测SATB1-shRNA转染的A549细胞凋亡率。结果:经凝胶电泳、 DNA测序鉴定分析,成功构建了SATB1-shRNA。 RT-PCR和Western-Blot结果显示SATB1-shRNA转染成功后可显著下调A549细胞中SATB1mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05)。RT-PCR和Western-Blot结果显示Bcl2表达水平下降(P<0.05),SATB1-shRNA转染组BAX、Caspase-3表达水平上调(P<0.05)。FCM检测结果示SATB1-shRNA转染组细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论:SATB1-shRNA经转染肺癌A549细胞能有效抑制细胞中SATB1mRNA和蛋白的表达水平,诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl2基因表达所引起的级联效应有关。
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