胃癌是一种十分复杂的疾病,是多种因素包括幽门螺旋杆菌感染、饮食习惯以及遗传因素共同作用的结果。如今,胃癌是世界第五大常见肿瘤以及第三大肿瘤致死疾病。每年有约951,000新发病例以及723,000死亡患者。超过70%的胃癌发生在发展中国家,超过半数发生在东亚地区（主要在中国）。在中国,根据流行病学资料,胃癌是第三大肿瘤发病率高达29.24人/10万,并且其肿瘤致死率也排在第三位。相对局限的诊断技术以及治疗方案造成全球的5年生存率近在30%左右。造成这一结果的主要原因是我们对胃癌发生发展的潜在机制仍了解不足。众所周知,胃癌的病理过程同慢性萎缩性胃炎这样的癌前病变密切相关。三叶草因子1（Trefoil Factor 1,TFF1,也叫pS2）属于三叶草多肽家族,其通过二硫键形成一个三叶草样的结构域,拥有抵抗蛋白水解以及酸性环境的作用。TFF1的主要功能是保护胃黏膜的完整性。TFF1最早在人类乳腺癌细胞株MCF7中被发现,随后被发现其主要位于胃黏膜中,主要由胃体至幽门的隐窝细胞的上部所分泌。当黏膜受损时,TFF1的表达显著增加,同时约有60%的肿瘤显示出了TFF1的丢失。同癌旁正常组织相比,TFF1在肿瘤组织的表达显著下降。由于TFF1对幽门胃窦黏膜的分化十分重要,当其缺失时可能造成未分化胃上皮细胞的聚集,而这些细胞有可能进展为肿瘤细胞。根据前期研究报道,TFF1可以通过诱导细胞由G1期向S期转化的延迟来达到抑制细胞增殖的目的。当TFF1丢失时,可以通过激活IKK/NF-κB通路以及依赖PP2A的β-catenin通路来促进胃癌肿瘤的形成。因此,TFF1常被认为是一种胃癌特异性的肿瘤抑制基因,这一结论更是被tff1基因敲除小鼠充分的证明了。目前有关抑制TFF1表达的相关机制已有报道。杂合子丢失（LOH）以及启动子高甲基化可以解释胃癌中TFF1基因的沉默。在亚硝基脲诱导的胃癌小鼠模型中tff1启动子H3K9的甲基化以及H3的去乙酰化会诱导tff1的低表达。此外,在转录层面,CCAAT/增强子绑定蛋白β以及共转录因此BRCA1也具有抑制TFF1表达的作用。然而,调控TFF1表达的相关机制仍需要我们进一步研究。遗传学改变也是导致胃癌发生的重要因素。TFF1基因的体细胞突变仅在少数胃癌肿瘤中被发现。因此,单核苷酸基因多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）,作为人类最常见的一种遗传学变异,应该被纳入我们的研究中。然而目前为止,仅有一篇目前,仅有一篇小样本伊朗人群的文献报道了TFF1基因相关的单个SNP位点与胃癌发病风险的关系,仍缺乏大样本的系统性研究。我们打算采用tagSNPs选点策略,因为同单位点分析相比,其具有更强的效能,可以更好地帮助我们确立影响复杂疾病发生的重要遗传变异。本研究我们将采用大样本的两阶段病例-对照研究设计,探讨TFF1的基因多态性与胃癌发生风险以及术后预后生存的相关性。并利用相关分子生物学实验,初步阐明这些位点影响胃癌发生发展的相关机制。为胃癌的早期诊断和个体化治疗提供新的理论依据。第一部分TFF1基因多态性与胃癌发生风险的相关性研究研究背景:目前我们对TFF1表达的调控机制有了一定的了解,但仍不充分,而基因的遗传变异也可能参与了TFF1的调控。由于TFF1基因的体细胞突变仅在大约5%的胃癌中被发现,而SNPs又被认为是最常见的一种遗传变异,因此研究TFF1基因相关的SNPs具有一定的科研价值。在本研究中,我们首次提出了利用tagSNPs来探索TFF1基因相关SNPs与胃癌风险的相关性。方法及结果:我们通过HapMap数据库筛选了位于TFF1基因上以及其启动子区域的tagSNP,并最终确立5个tagSNP位点。随后通过病例对照研究方法,在大样本的两阶段人群中,检测和分析这些多态性位点的基因型对胃癌遗传易感性的影响。结果发现rs3761376 AA基因型同胃癌的发生风险密切相关。同时为了进一步了解该位点的作用,我们利用荧光素酶报告基因实验、电泳迁移变动实验（EMSA）和实时定量PCR等分子生物学实验,初步阐明了其可能起到的作用及相关机制。发现rs3761376等位基因A具有影响刺激素受体结合TFF1启动子的能力。结论:rs3761376等位基因A通过影响雌激素受体与TFF1启动子的结合,降低了TFF1的表达水平,最终导致胃癌发生风险的增加。第二部分TFF1基因多态性与胃癌患者预后的相关性研究研究背景:多项研究提示了基因多态性与癌症预后的关系。这些结果都提示了将SNPs作为肿瘤预后标志物的可行性。目前尚没有研究报道了TFF1多态性位点与胃癌预后的关系。方法与结果:本研究选取了在一阶段样本中与胃癌易感性存在相关性的两个tagSNPs（rs3761376,rs2839488）,通过大样本队列研究,分析了它们同胃癌预后的相关性,发现rs3761376隐性模型是术后化疗患者以及淋巴结转移患者预后不良的标志,而rs2839488的显性模型是术后化疗患者的预后良好标志。此外,通过逐步Cox回归分析,我们还发现rs3761376隐性模型以及淋巴结转移是胃癌术后化疗患者的独立预后因素。结论:rs3761376隐性模型是术后化疗患者以及淋巴结转移患者预后不良的标志,而rs2839488的显性模型是术后化疗患者的预后良好标志。rs3761376隐性模型以及淋巴结转移是胃癌术后化疗患者的独立预后因素。第三部分TFF1与5-FU化疗敏感性的相关研究研究背景:根据我们的前期研究成果,我们发现TFF1 rs3761376 AA基因型可以影响启动子与转录因子的结合能力,进而导致TFF1表达下降;同时该基因型又被发现是影响胃癌术后化疗患者生存的独立危险因素。因此我们推测TFF1可能会影响化疗药物的敏感性。研究方法和结果:通过过表达以及抑制TFF1的表达水平,我们进行了增殖以及凋亡实验,发现TFF1具有影响5-FU诱导的细胞增殖以及凋亡的作用。随后通过m RNA测序,我们筛选出了可能受TFF1表达影响的增殖凋亡相关蛋白BAD、RBL1以及Pyk2。通过实时荧光定量PCR我们确认了这三个蛋白与TFF1的相关性。结论:TFF1可能通过调控BAD、RBL1以及Pyk2的表达来影响5-FU诱导的细胞增殖以及凋亡的作用。