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委陵菜属(Potentilla)植物全世界约500余种,大多分布在北半球温带、寒带及高山地区,极少数种类接近赤道。我国有90多种,全国各地均产,但主要分布在东北、西北和西南各省区。委陵菜属植物种类多,数量大,药理活性显著,具有很高的研究价值。目前本属植物中研究较多的有翻白草,委陵菜,鹅绒委陵菜,多裂委陵菜,粘委陵菜和金露梅等。该属植物在我国传统医学中具有一定地位,其中多种植物作为常用中药沿用至今。现代药理研究表明该属植物具有明显的抗糖尿病,保肝,镇痛,抗菌,抗病毒等作用,并在临床上用于治疗糖尿病,痢疾等病。中药翻白草是蔷薇科(Rosaceae)委陵菜属(Potentilla)植物翻白草(Potenlilla discolor Bunge.)的干燥全草,别名鸡腿根、鸡脚草,天藕、翻白委陵菜、叶下白、鸡爪参等。《本草纲目》、《救荒本草》中均记载翻白草具有清热解毒止血消肿之功效。翻白草为多年生草本植物,根粗壮,下部常肥厚呈纺锤形,形似鸡腿所以别名又叫鸡腿根。小叶对生或互生,无柄,小叶片长圆形或长圆披针形,顶端圆钝,基部楔形、宽楔形或偏斜圆形,边缘具圆钝锯齿,上面暗绿色,被稀疏白色绵毛或脱落几无毛,下面密被白色或灰白色绵毛;基生叶托叶膜质,褐色,外面被白色长柔毛,茎生叶托叶草质,绿色,卵形或宽卵形,边缘常有缺刻状牙齿,下面密被白色绵毛,因此常通过叶裂深度区别委陵菜与翻白草。翻白草产自黑龙江、辽宁、内蒙古、河北、山西、陕西、山东、河南、江苏、安徽、浙江、江西、湖北、湖南、四川、福建、台湾、广东。生于荒地、山谷、沟边、山坡草地、草甸及疏林下,海拔100-1850米。日本、朝鲜也有分布。《中国药典》中记载翻白草性甘、微苦,平;归肝、胃、大肠经。具有清热解毒,止痢止血的功效,用于湿热泻痢,痈肿疮毒,血热吐衄,便血,崩漏。翻白草作为应用历史悠久的常用中药,具有广泛的用途。研究表明,翻白草含有多种化学成分,主要包括黄酮类(含黄酮,异黄酮,二氢黄酮苷元及其苷等),其中山柰酚,槲皮素,柚皮素的苷元及其苷较常见;萜类(主要为三萜及其皂苷,也含有少量单萜、倍半萜及其苷),其中乌苏烷型三萜类化合物较为常见,也含有部分齐墩果烷型三萜,羽扇豆烷型三萜较为罕见;多酚及鞣质类(包括鞣花酸及其衍生物,缩合鞣质及可水解鞣质等),其中鞣花酸及其苷较为常见。研究发现翻白草具有抗菌、止泻、抗肿瘤、免疫抑制和降血糖等药理作用,亦有研究表明翻白草能降低血糖,保护胰岛β细胞,增强胰岛素抵抗等作用。在民间,尤其中国南方部分地区包括云南、广西等省份,常用翻白草的叶子泡水喝用于治疗2型糖尿病,具有良好的临床效果。近年翻白草用于治疗糖尿病的研究较多,且目前临床也常用翻白草来治疗糖尿病,但其降血糖成分及机理尚不十分明确,因此本论文先对翻白草(Potenlilla discolor Bge.)干燥带根全草的粗提物及不同萃取部分进行了 α-葡萄糖苷酶抑制试验研究,根据实验结果对α-葡萄糖苷酶抑制活性较好的萃取部分的化学成分进行了系统研究,并对其中的部分单体也进行了 α-葡萄糖苷酶抑制试验研究。本实验采用4-硝基苯基-α-吡喃葡萄糖苷(PNPG)法对翻白草的不同提取物、乙醇提取物的不同萃取部分进行了 α-葡萄糖苷酶抑制试验的活性评价。提取物部分的IC50(mg/mL)分别为:95%乙醇提取物(PD95)0.012,60%乙醇提取物(PD60)0.005,水提物(PDWH)0.015;萃取物部分的IC50(mg/mL):二氯甲烷萃取物(PDC)0.01,乙酸乙酯萃取物(PDE)0.001,正丁醇萃取物(PDB)0.011,正丁醇萃取后水部分(PDH)0.036,正丁醇萃取物经D101大孔吸附树脂分离的水洗脱部分(PDB-H2O)0.051,正丁醇萃取物经D101大孔吸附树脂分离的30%乙醇洗脱部分(PDB-30)0.002,正丁醇萃取物经D101大孔吸附树脂分离的50%乙醇洗脱部分(PDB-50)0.009,正丁醇萃取物经D101大孔吸附树脂分离的95%乙醇洗脱部分(PDB-95)0.089;阳性对照阿卡波糖0.385。综上研究结果,翻白草的粗提物均具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其中PDE、PDB-30、PDB-50、PDC部分活性较好。因此根据活性实验结果,本实验采用了各种分离手段和鉴定方法,从翻白草醇提物中分离并鉴定了 31个化合物,其中11个化合物系首次从该属植物中分到。实验流程如下:翻白草干燥带根全草19 kg,用95%乙醇冷浸2周,得到冷浸液,减压浓缩,回收乙醇溶剂。将浸泡后的翻白草用95%乙醇溶液加热回流提取2次,每次2 h,过滤,滤渣继续用60%乙醇溶液加热回流提取2次,每次2 h,合并提取液,减压浓缩,回收乙醇溶剂,得到浸膏3.25 kg。将浸膏用蒸馏水混悬,然后依次用等体积石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,减压回收萃取液得到石油醚萃取部分(PDP)、二氯甲烷萃取部分(PDC)、乙酸乙酯萃取部分(PDE)和正丁醇萃取部分(PDB)。二氯甲烷萃取部分(PDC)通过各种柱色谱分离纯化,并综合运用多种波谱技术进行解析,鉴定了 8个化合物,它们分别是:PDC-4(naringenin柚皮素)、PDC-5(2-oxo-pomolic acid 2-羰基坡模酸)、PDC-6(oleanolic acid 齐墩果酸)、PDC-7(ursolic acid 乌苏酸)、PDC-8(2α,3α,19α-trihydroxy-12-ursen-28-oic acid 2α,3α,19α-三羟基-12-烯-28-乌苏酸)、PDC-10(2α,3 β-dihydroxyolean-12-en-28-oic acid 2α-羟基齐墩果酸)、PDC-11(kaempferol 山柰酚)、PDC-14(fupenzic acid覆盆子酸)。乙酸乙酯萃取部分(PDE)通过各种柱色谱分离纯化,并综合运用多种波谱技术,鉴定了 23 个化合物,分别是:PDE-1(3,3’-di-O-methylellagic acid 3,3’-二甲基鞣花酸)、PDE-2(3-O-methylellagic acid-4’-O-α-L-rhamnopyranoside 3-甲基-4’-O-α-L-鼠李糖苷)、PDE-3(3,3’,4-tri-O-methylellagic acid 4’-O-β-D-xylopyranoside 3,3’,4-三甲基-4’-O-β-D-木糖苷)、PDE-4(3,3’-di-O-methylellagic acid 4’-O-β-D-xylopyranoside 3,3’-二甲基-4’-O-β-D-木糖苷)、PDE-5(gallic acid 没食子酸)、PDE-6(3,3’,4-tri-O-methylellagic acid 4’-O-β-D-glucopyranoside 3,3’,4-三甲基-4’-O-β-D-葡萄糖苷)、PDE-7(3,3’-di-O-methylellagic acid 4’-O-β-D-glucopyranoside 3,3’-二甲基-4’-O-β-D-葡 萄 糖 苷)、PDE-8(quercetin 槲 皮 素)、PDE-9(kaempferol-3-O-β-D-glucuronide-6"-methyl ester 山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸-6"-甲酯),PDE-10(trans-tiliroside 翻白叶苷 A)、PDE-11(kaempferol-3-O-β-D-glucuronide 山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷),PDE-12(ethyl gallate 没食子酸乙酯)、PDE-13(3,3’,4,4’-tetrahydroxybiphenyl 3,3’,4,4’-四羟基联苯)、PDE-14(quercetin-3-O-β-D-glucuronide-6"-methyl ester 槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸-6"-甲酯)、PDE-15(cis-tiliroside)、PDE-16(naringenin 5-O-β-glucoside 柚皮素 5-O-β-葡萄糖苷)、PDE-17(kaempferol-3-O-β-D-glucoside山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷)、PDE-18(isosalipurposide)、PDE-19(isoquercitrin异槲皮苷)、PDE-20(schizandriside)、PDE-21(tiliamuroside B)、PDE-22((-)-(8S,7’R,8’S)-isolariciresinol-9’-O-α-L-rhamnoside)、PDE-23((-)-isolariciresinol-9’-O-β-D-xylopyranoside)。正丁醇萃取部分(PDB)运用D101大孔吸附树脂柱色谱进行粗分离,分别用蒸馏水,30%乙醇-水,50%乙醇-水,95%乙醇-水依次进行洗脱得到水洗脱部分(PDB-H2O),30%乙醇洗脱部分(PDB-30),50%乙醇洗脱部分(PDB-50),95%乙醇洗脱部分(PDB-95)。综上所述,本论文对翻白草干燥带根全草乙醇提取物的不同萃取部分通过正向硅胶柱色谱法、ODS反向柱色谱法、聚酰胺柱色谱法、D101大孔吸附树脂柱色谱法、葡聚糖凝胶柱色谱法、制备高效液相柱色谱法以及重结晶等多种方法,共得到37个单体化合物,并综合运用一维及二维核磁共振谱、旋光光谱法、红外分光光度法、紫外分光光度法、高分辨质谱分析等波谱技术以及与标准品比对的方法,鉴定了其中31个化合物的结构。包括6个三萜类化合物(PDC-5(2-oxo-pomolic acid 2-羰基坡模酸)、PDC-6(oleanolic acid齐墩果酸)、PDC-7(ursolic acid 乌苏酸)、PDC-8(2α,3α,19α-trihydroxy-12-ursen-28-oic acid 2α,3 α,19α-三 羟 基-12-烯-28-乌 苏 酸)、PDC-10(2α,3β-dihydroxyolean-12-en-28-oic acid 2α-羟基齐墩果酸)、PDC-14(fupenzic acid覆盆子酸));12个黄酮类化合物(PDC-4(naringenin柚皮素)、PDC-11(kaempferol 山柰酚)、PDE-8(quercetin 槲皮素)、PDE-9(kaempferol-3-O-β-D-glucuronide-6"-methyl ester 山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸-6"-甲酯),PDE-10(trans-tiliroside 翻白叶苷 A)、PDE-11(kaempferol-3-O-β-D-glucuronide 山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷)、PDE-14(quercetin-3-O-β-D-glucuronide-6"-methyl ester 槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸-6"-甲酯)、PDE-15(cis-tiliroside)、PDE-16(naringenin 5-O-β-glucoside 柚皮素5-O-β-葡萄糖苷)、PDE-17(kaempferol-3-O-β-D-glucoside 山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷)、PDE-18(isosalipurposide)、PDE-19(isoquercitrin 异槲皮苷));9 个鞣花酸类化合物(PDE-1(3,3’-di-O-methylellagic acid 3,3’-二甲基鞣花酸)、PDE-2(3-O-methylellagic acid-4’-O-α-L-rhamnopyranoside 3-甲基-4’-O-α-L-鼠李糖苷)、PDE-3(3,3 ’.4-tri-O-methylellagic acid 4’-O-β-D-xylopyranoside 3,3’,4-三甲基-4’-O-β-D-木糖苷)、PDE-4(3,3’-di-O-methylellagic acid 4’-O-β-D-xylopyranoside 3,3’-二甲基-4’-O-β-D-木糖苷)、PDE-5(gallic acid 没食子酸)、PDE-6(3,3’,4-tri-O-methylellagic acid 4’-O-β-D-glucopyranoside 3,3’,4-三甲基-4’O-β-D-葡萄糖苷)、PDE-7(3,3’-di-O-methylellagic acid 4’-O-β-D-glucopyranoside 3,3’-二甲基-4’-O-β-D-葡萄糖苷)、PDE-12(ethyl gallate 没食子酸乙酯)、PDE-13(3,3’,4,4’-tetrahydroxybiphenyl 3,3’,4,4’-四羟基联苯));4 个木脂素类化合物(PDE-20(schizandriside)、PDE-21(tiliamuroside B),PDE-22((-)-(8SS,7’R,8’S)-isolariciresinol-9’-O-α-L-rhamnoside)、PDE-23((-)-isolariciresinol-9’-O-β-D-xylopyranoside))。结构已确定的 31 个化合物中 PDE-3(3,3’,4-tri-O-methylellagic acid 4’-O-β-D-xylopyranoside 3,3’,4-三甲基-4’-O-β-D-木糖苷)、PDE-9(kaempferol-3-O-β-D-glucuronide-6"-methyl ester 山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸-6"-甲酯)、PDE-13(3,3’,4,4’-tetrahydroxybiphenyl 3,3’,4,4’-四羟基联苯)、PDE-14(quercetin-3-O-β-D-glucuronide-6"-methyl ester 槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸-6"-甲酯)、PDE-15(cis-tiliroside)、PDE-16(naringenin 5-O-β-glucoside 柚皮素5-O-β-葡萄糖苷)、PDE-18(isosalipurposide)、PDE-20(schizandriside)、PDE-21(tiliamuroside B),PDE-22((-)-(8SS,7’,7’R,8’S)-isolariciresinol-9’-O-α-L-rhamnoside)、PDE-23((-)-isolariciresinol-9’-O-β-D-xylopyranoside)是首次从委陵菜属植物中分离得到。本论文对翻白草的乙醇提物进行了比较系统的化学成分研究后,又对分到的多个单体进行α-葡萄糖苷酶抑制试验研究,结果如下:三萜类化合物的IC50(mg/mL):PDC-5(2-羰基坡模酸)0.047,PDC-6(齐墩果酸)和 PDC-7(乌苏酸)的混合物0.009,PDC-6(齐墩果酸)0.006,PDC-7(乌苏酸)0.003,PDC-8(2α,3α,19α-三羟基-12-烯-28-乌苏酸)0.05;黄酮类化合物的IC50(mg/mL):PDC-4(柚皮素)0.351,PDE-8(槲皮素)0.05,PDE-9(山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸-6"-甲酯)0.665,PDE-10(翻白叶苷 A)0.219,PDE-16(柚皮素 5-O-β-葡萄糖苷)和PDE-17(山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷)0.579,PDE-17山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷)0.199;鞣花酸类化合物几乎无α-葡萄糖苷酶抑制活性。因此,单体中PDC-6和PDC-7活性最好;从整体看三萜类化合物α-葡萄糖苷酶抑制活性优于黄酮类,鞣花酸类化合物几乎无活性。本论文的研究结果不仅为明确翻白草的药效物质基础提供了理论基础,也为其在抗Ⅱ型糖尿病机制方面的进一步研究提供了科学依据。