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无花果（Ficus carica L.）属桑科（Moraceae）榕属（Ficus），果实味美，且具有抗癌防衰老等保健价值，应用前景广阔。但无花果采后迅速软化，适宜条件下冷藏也仅可保证7～10d的货架期，严重阻碍了无花果产业的发展。培育抗软化、耐贮运无花果的品种具有重要的实际意义：传统保鲜技术在生产中成本高、管理困难且收效甚微，所以培育耐贮运的高品质无花果品种，成为无花果育种的重要目标之一。乙烯是导致跃变型果实衰老软化的关键因素，抑制果实成熟期间乙烯的生物合成，可有效延缓果实的衰老软化过程。因此通过转基因技术调控乙烯生物合成过程中两个关键酶——ACC合成酶（ACS）和ACC氧化酶（ACO），有望解决无花果的完熟软化问题。本研究以无花果果实为研究对象，从绿果无花果“青皮”基因组DNA中分离了ACS1基因片段，构建了ACS1基因的反义及RNAi植物表达载体，并将其转化到农杆菌中，为采用生物技术方法延缓或抑制无花果软化、提高其耐贮性奠定基础。主要研究结果如下：1、青皮无花果ACS1基因片段的克隆。根据GenBank中登录的Masui Dauphine无花果ACS1基因保守氨基酸序列，设计合成了一对特异引物，PCR扩增得到一条长590bp的特异片段，序列分析结果表明，除引物外，该序列与GenBank上已登陆的Masui Dauphine-ACS1的cDNA序列同源性达99%，氨基酸的同源性达98%，无内含子序列。表明该克隆片段是青皮无花果ACS1基因片段。2、无花果反义植物表达载体的构建。将克隆到的无花果ACS1基因片段反向插入到中间载体pBI221质粒的XbaⅠ-BamHⅠ酶切位点之间，构建成反义中间表达载体pBI221-anti-ACS1。用XbaⅠ/EcoRⅠ双酶切pBI221-anti-ACS1表达载体及pBI121质粒，酶切下中间表达载体pBI221-anti-ACS1的反义片段、GusA基因和NOS终止子，定向插入到切除了GusA基因和NOS终止子的pBI121质粒中，构建成反义植物表达载体pBI121-anti-ACS1。3、无花果RNAi植物表达载体的构建。先将无花果ACS1基因片段正向插入到反义中间表达载体pBI221-anti-ACS1质粒的BamHⅠ-SmaⅠ酶切位点之间，构建成RNAi中间表达载体pBI221-RNAi-ACS1；再用XbaⅠ/EcoRⅠ双酶切pBI221-RNAi-ACS1表达载体及pBI121质粒，将从载体pBI221-anti-ACS1切下的的反义片段、正义片段、GusA基因和NOS终止子，定向插入到切除了GusA基因和NOS终止子的pBI121质粒中，构建成RNAi植物表达载体pBI121-RNAi-ACS1。重组质粒经PCR和酶切的方法验证。4、农杆菌转化。利用冻融法将pBI121-anti-ACS1、pBI121-RNAi-ACS1两个表达载体转化到农杆菌LBA4404中，转化菌液经PCR验证，证实表达载体已转入农杆菌。