假交替单胞菌R3群体感应特性及sRNA对其调控的机理研究

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群体感应(quorum sensing,QS)是细菌通过产生、释放、感应信号分子来调控靶标基因的表达,从而调控群体生理代谢活动的一种现象。假交替单胞菌是一类海洋细菌,能产多种活性物质,它们具有重要的生物学和生态学功能。目前,关于假交替单胞菌的群体感应研究鲜有报道。前期,我们对一株产多种活性物质的假交替单胞菌R3进行了全基因组测序。本文期望基于全基因组测序结果分析菌株R3的群体感应系统,研究其特性,并探究菌株R3中sRNA对群体感应系统的调控作用。首先本研究在R3全基因组测序基础上,分析R3的群体感应系统相关基因,发现R3可能存在3类群体感应系统。对其中一套典型的LuxI/R型群体感应系统进行了深入研究,序列相似性的分析表明luxI编码的合成酶序列与已知的同源蛋白序列一致性仅为34.9%,可能是新的LuxI型合成酶。在紧邻luxI的下游,我们发现了一个编码AHLs受体蛋白的luxR型基因。通过无痕敲除技术,我们发现luxI或luxR缺失均让菌株R3丧失产AHLs的能力。转录水平分析发现LuxI/R存在互为正调控的关系。我们将菌株R3的luxI基因成功在大肠杆菌中进行了表达,薄层色谱分析推测菌株R3可能产生两类AHLs,分别为C8-HSL和3-OH-C6-HSL。为了研究sRNA对群体感应的调控,我们构建了sRNA分子伴侣Hfq的缺失株,发现hfq缺失导致菌株R3不再产生AHLs,而且luxI和luxRmRNA相对表达量均显著性下降,说明Hfq介导的调控系统对LuxI/R型群体感应系统有正调控作用。我们在?luxI和?luxR中回补了不含5’UTR区域的luxI和luxR(?luxc-UTR和?luxRc-UTR),与回补有5’UTR区域的回补株(?luxIc和?luxRc)进行表型比较发现仅?luxRc-UTR无法回补表型,说明相关的调控区域是在luxR的5’UTR区域,是Hfq依赖的调控型sRNA常见的作用靶点,推测假交替单胞菌中存在Hfq依赖的调控型sRNA能够正调控luxR的表达。最后,通过生物信息学预测和转录组测序结果分析以及进一步的转录水平分析,我们预测并鉴定了Hfq依赖的调控型sRNA,得到了2个可能对LuxI/R型群体感应有正调控作用的sRNA。
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