本试验以8a生转Bt基因败育毛白杨雄株-D和非转基因的对照败育毛白杨雄株-D(Populus tomentosa Stub-D)为试验材料,通过分离植物体内、体外、根际土壤、转Bt基因毛白杨枯落物及其以下不同深度土层中和转Bt基因毛白杨蛀干桑天牛(Apriona germari Hope)排泄物中可培养细菌和真菌,利用35S启动子和Bt基因两段基因设计特异引物,对获得的微生物进行转基因毛白杨外源Bt基因PCR检测,主要结果如下:(1)分别用2对特异引物对转Bt基因毛白杨进行外源基因PCR检测,发现14个系号的转基因毛白杨均检测到外源Bt基因和NptⅡ基因。(2)分离纯化得到真菌307株次,细菌2526株次。其中从转基因毛白杨根部及根际土壤中分离得到真菌78株次,细菌95株次,从茎部分离得到真菌24株次,细菌36株次,从新鲜片分离得到真菌16株次,细菌25株次;从未转基因的对照毛白杨根部及根际土壤中分离得到真菌60株次,细菌39株次,从茎部分离得到真菌16株次,细菌19株次,从新鲜叶片分离得到真菌22株次,细菌22株次;从转基因毛白杨枯落物分离得到真菌18株次,细菌2145株次;从不同深度的土层分离得到真菌33株次,细菌81株次;从天牛排泄物分离得到真菌39株次,细菌42株次。(3)用特异引物对分离纯化得到的真菌和细菌进行外源Bt基因的PCR检测,发现了4株次真菌和7株次细菌有可稳定重复的PCR阳性结果。具阳性结果的真菌中有1株来自转基因毛白杨根际土,1株来自非转基因毛白杨根际土,1株来自转基因毛白杨种植地的20 cm深土层,1株来自蛀干桑天牛排泄物;细菌中有2株来自转基因毛白杨根内,2株来自转基因毛白杨茎面,1株来自转基因毛白杨茎内,1株来自转基因毛白杨种植地的0 cm土层。(4)对具有稳定并可重复的PCR检测结果的菌株,设计特异引物,PCR扩增细菌16S rRNA的部分序列,真菌扩增28S rDNA D1/D2区及ITS区,分别对扩增产物测序,后与GenBank中已知的序列进行同源性比较,并结合形态特征将未知菌株鉴定到属。结果细菌均属类芽孢杆菌属(Paenibacillus),真菌中对两个菌株进行了鉴定,分别属枝孢属(Fusarium)和镰刀菌属(Cladosporium)。(5)对从枯落物中发现的具有稳定并可重复PCR结果的细菌菌株的特异扩增片段进行基因测序,其序列信息与Bt基因同源性很小,仅为58.34%,排除了PCR反应造成的假阳性,在转基因毛白杨枯落物的可培养细菌中没有发现基因转移。