抗菌肽(antimicrobial peptide，AMP)是生物体用来抵制外来入侵病原体的一类小分子蛋白质或短肽，研究表明AMP对细菌具有广谱高效杀菌活性，对部分真菌、病毒及癌细胞等具有强杀伤作用，但是对真核细胞毒性较小，并且不易产生耐药性。近年来，转基因植物在生产药用蛋白、重组疫苗等方面的研究取得了举世瞩目的成就。植物作为生产药用蛋白的生物反应器，为人类提供了一个更加安全和廉价的生产体系。因此，利用植物生产抗菌肽具有广阔的应用前景。抗菌肽Shiva-1是Cecropin B的类似物(张丽,2005)，对革兰氏阳性菌和阴性菌都具有很强的杀伤力,而对真菌和真核细胞没有毒性。本研究通过基因工程的手段，以抗菌肽Shiva-1的氨基酸序列为模板，人工合成经过改造的目的基因，命名为Shiva-2。期望以烟草作为生物反应器生产抗菌肽Shiva-2，探索利用植物生物反应器生产抗菌肽的可行性本试验主要取得如下结果：1.根据天蚕素B的突变体Shiva-1的氨基酸序列，兼顾烟草偏爱密码子，并在目的基因的上游添加了Kozak序列，以增强基因的转录和表达；在基因的下游加入Gly的密码子以确保其生物学活性；并添加了酶切位点，用于载体的构建，全基因人工合成获得目的基因。2.将目的基因Shiva-2克隆进高效植物双元表达载体pPZP211中，构建真核表达载体pPZP211-Shiva-2，利用三亲交配法将载体pPZP211-Shiva-2导入农杆菌MP90中，并通过农杆菌介导法将目的基因转入烟草中进行瞬时表达，但表达的目的蛋白的生物学活性很低或是没有生物学活性。3.为了探究合成基因所表达的蛋白是否具有生物学活性，构建出原核表达载体pET-28a-Shiva-2，并转化宿主菌BL21，表达产物对宿主菌有一定的抑制，推测异源抗菌肽Shiva-2产生抑菌活性。4.构建中间表达载体pKS-PA，为以烟草叶绿体作为生物反应器表达目的基因Shiva-2奠定了基础。