目的1.分析Pirh2在脑胶质瘤(glioma)患者中的表达情况,探讨Pirh2表达与脑胶质瘤发生发展及患者预后的关系。2.研究Pirh2对胶质瘤肿瘤细胞凋亡及增殖的影响,探讨Pirh2调控胶质瘤进展的分子机制,并为胶质瘤的临床预后判断及治疗提供新的靶点和思路。方法1.运用免疫印迹(Western blot)的办法,在组织水平检测2例正常的脑组织、和6例不同级别胶质瘤组织中Pirh2表达的情况。免疫组化(IHC)方法检测90例胶质瘤中Pirh2与Ki-67的表达情况,通过卡方检验分析Pirh2的表达与胶质瘤WHO分级及肿瘤增殖指标Ki-67表达之间的关系,并通过Kaplan–Meier生存曲线分析的方法,分析Pirh2的表达量对胶质瘤患者生存期的影响。2.在细胞水平,用Western blot的实验方法检测胶质瘤H4、A172、U87MG、U118和U251MG细胞株中Pirh2的表达情况。在U87MG细胞系中,通过siRNA抑制Pirh2表达,利用Western blot测定凋亡相关蛋白Bcl-2以及Cleaved caspase-3的表达变化,并通过Western blot检测细胞增殖相关蛋白PCNA和cyclin D1的表达变化3.Pirh2表达受到抑制后,通过流式细胞检测技术测定胶质瘤肿瘤细胞凋亡及增殖的变化情况。流式细胞术检测细胞周期,CCK-8实验、克隆形成试验检测胶质瘤细胞增殖变化。结果1.Western blot以及免疫组化的结果提示,与正常的脑组织相比,Pirh2的表达量在胶质瘤组织中明显增高,并且与胶质瘤级别密切相关,高级别胶质瘤中Pirh2表达量高于低级别胶质瘤组织。不同级别胶质瘤(P<0.003)及Ki-67表达不同(P<0.001)的胶质瘤组织中Pirh2的表达强度不同,其差异有统计学意义。在胶质瘤细胞中相关性分析显示Pirh2表达与胶质瘤肿瘤增殖相关蛋白Ki-67密切相关。在胶质瘤中当Pirh2表达增多,Ki-67表达增高。此外,Kaplan-Merier分析显示胶质瘤细胞中Pirh2表达差异与患者总生存率密切相关(P<0.01)。2.在胶质瘤的五种细胞株中,U87MG细胞株中的Pirh2表达量最高。在U87MG细胞中抑制Pirh2表达后,凋亡蛋白cleaved caspase-3的水平变高,Bcl-2的水平降低。同时细胞周期蛋白PCNA和CyclinD1的表达水平降低,3.在U87MG细胞中干扰Pirh2表达后,通过流式仪可以发现胶质瘤细胞凋亡增加增殖减少,同时CCK8试验、克隆形成试验提示细胞增殖减少。结论1.Pirh2在胶质瘤中表达增高,与胶质瘤WHO分级正相关且与增殖指标Ki-67的表达情况呈正相关;同时Pirh2表达和神经胶质瘤患者的临床预后相关,提示Pirh2可能参与神经胶质瘤的发生和发展。2.Pirh2表达可以抑制神经胶质瘤细胞的凋亡并且促进肿瘤细胞的增殖,而抑制Pirh2的表达可使胶质瘤细胞凋亡增多,增殖受抑制。因此我们推测Pirh2可能成为胶质瘤治疗的新靶点。