沙丁胺醇（Salbutamol,SAL）是人工合成的一类肾上腺素药物,常被非法作为饲料添加剂用于畜产品的生产,给我国动物源性食品安全带来巨大威胁。单链抗体（Single-chain variable region fragment,Sc Fv）因具有分子量小、操作简单而且生产成本低等特点,已逐渐成为建立免疫学快速检测方法的重要研究对象。因此,本研究旨在利用噬菌体展示技术构建鼠源免疫噬菌体单链抗体库,从中筛选出抗SAL Sc Fv,为后期建立免疫学快速检测方法提供理论依据和物质基础。本试验采用混合酸酐法和活化酯法分别制备完全抗原SAL-BSA/OVA,SAL-BSA免疫小鼠后,取小鼠脾脏提取总RNA,PCR技术获得Sc Fv基因,并经电转化至TG1感受态细胞,辅助噬菌体M13K07侵染后构建SAL噬菌体单链抗体库。然后,以SAL-BSA/OVA为靶抗原对SAL噬菌体单链抗体库进行四轮富集淘选,将鉴定后的阳性克隆转化至E.coli HB2151菌株中进行诱导表达,采用渗透休克法提取周质腔内可溶性Sc Fv后对其进行生物学活性鉴定。结果显示,经SDS-PAGE法和紫外光谱扫描法鉴定,成功制备完全抗原SAL-BSA/OVA,检测小鼠血清抗体效价约为1:12 800;成功扩增出小鼠抗体VH、VL和Sc Fv基因片段,大小分别约为350 bp、320 bp和750 bp,与预期结果相符。将重组质粒Sc Fv-p CANTAB5E转化后,其阳性插入率为83.3%,抗体库多样性为85%,获得了库容为5.75×105cfu/m L的噬菌体单链抗体库。富集淘选和测序结果显示,获得一株大小为702 bp,编码234个氨基酸的SAL-Sc Fv-3抗体。经BLAST比对分析显示,SAL-Sc Fv-3的VH和VL基因序列与小鼠免疫球蛋白VH和VLκ链的同源性分别为90.18%和91.59%;Ex PASy分析SAL-Sc Fv-3的理化性质,SAL-Sc Fv-3的分子量为25.06 k Da,等电点p I为8.74,亲水性平均值为-0.471。经侵染E.coli HB2151菌株进行可溶性表达的鉴定结果显示,周质腔提取物的抗体效价约为1:320,IC50为294.86μg/L,除与CLB和CIB有一定交叉反应外,与所检测的其他结构类似物均无交叉反应。综上所述,本研究成功构建了库容量为5.75×105cfu/m L的SAL鼠源噬菌体单链抗体库,并成功筛选出一株具有一定生物学活性的抗SAL单链抗体。