【摘 要】
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目的:研究23-羟基白桦酸（23-Hydroxybetulinic acid,23-HBA）对葡聚糖硫酸钠（Dextran sulfate sodium,DSS）诱导的急性溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）的作用并探讨其可能的机制。方法:通过自由饮水给予DSS进行急性UC小鼠造模,美沙拉嗪作为阳性对照药物。雄性C57BL/6J小鼠适应性喂养5天后随机分为6组:空白对照组、模
【基金项目】
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国家自然科学基金:（NO.81774200）; 澳门科学技术发展基金（NO.078/2016/A2）
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目的:研究23-羟基白桦酸（23-Hydroxybetulinic acid,23-HBA）对葡聚糖硫酸钠（Dextran sulfate sodium,DSS）诱导的急性溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）的作用并探讨其可能的机制。方法:通过自由饮水给予DSS进行急性UC小鼠造模,美沙拉嗪作为阳性对照药物。雄性C57BL/6J小鼠适应性喂养5天后随机分为6组:空白对照组、模型组（3%DSS+1%吐温-80）、23-HBA低剂量组（3%DSS+3.75 mg/kg 23-HBA）、23-HBA中剂量组（3%DSS+7.5 mg/kg 23-HBA）、23-HBA高剂量组（3%DSS+15mg/kg 23-HBA）、阳性对照药物组（3%DSS+150 mg/kg美沙拉嗪）。23-HBA和美沙拉嗪均通过灌胃给药;造模周期为7天,期间每天观察小鼠粪便情况（稀便、血便）、称量小鼠体重;第8天处死取材。取结肠,称重、测量长度并拍照记录。取脾脏,观察形态,称重。根据小鼠体重、稀便及便血情况进行疾病活动指数（Disease activity index,DAI）评分。H＆E染色观察结肠组织病理变化;爱先蓝染色观察结肠组织杯状细胞的数量变化;氧化应激相关试剂盒检测结肠组织中丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量、髓过氧化物酶（Myeloperoxidase,MPO）活力及血清中超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）的活力变化;酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测结肠组织中炎症相关因子白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）、白细胞介素-10（Interleukin-10,IL-10）的水平变化;免疫组化与免疫印迹检测结肠组织中环氧合酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）与诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,i NOS）蛋白的表达;免疫组化、免疫印迹与免疫荧光检测结肠组织中核因子κappa B p65（Nuclear factor-kappa B p65,NF-κB p65）及NF-κB p-p65蛋白的表达;免疫印迹法检测细胞外调节蛋白激酶（Extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2）、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）、p-JNK、髓样分化因子（Myeloid differentiation factor88,My D88）、受体相互作用蛋白激酶1（Receptor-interacting protein kinase 1,RIP1）、白细胞分化抗原36（Cluster of differentiation 36,CD36）蛋白的表达;免疫组化法检测细胞增殖标志物Ki67蛋白的表达。结果:与空白组相比,模型组小鼠体重明显下降,DAI评分明显上升;结肠明显挛缩,结肠长度缩短、重量减轻;结肠组织结构完整性破坏较严重,粘膜层部分或全部细胞坏死,粘膜下层发现大量炎性细胞浸润及水肿,部分炎性细胞浸润到肌层;杯状细胞明显减少,隐窝部分或完全消失,腺体结构部分或完全破坏,结肠组织杯状细胞数量较空白组明显减少;结肠组织中MDA含量与MPO活力显著升高,血清中SOD活力明显下降;结肠组织中促炎因子IL-1β、IL-6水平明显升高,抑炎因子IL-10水平则明显下降;结肠组织中COX-2、i NOS、NF-κB p65、NF-κB p-p65、p-ERK1/2、p-JNK、My D88、RIP1蛋白的表达显著上调,CD36明显减少,Ki67蛋白表达显著上调。而23-HBA和美沙拉嗪组上述情况部分或完全逆转。结论:23-HBA对DSS诱导的急性UC小鼠具有明显的保护作用,该作用可能与抑制NF-κB p65的激活、抑制MAPK通路激活以及降低炎症因子的分泌等多种机制有关。
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