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目的:自身免疫性疾病是由Th17细胞介导的。Th17细胞是一种淋巴细胞亚群,由其转录因子维甲酸受体相关的孤儿受体RORγt的表达诱导分化。目前的研究是为了发现RORγt的新型非甾体类小分子反向激动剂,并确定它们对Th17细胞介导的自身免疫性疾病的影响。方法:基于结构的虚拟筛选(SBVS)被用来寻找靶向RORγt的化合物。流式细胞术用于检测Th17细胞分化。双荧光素酶报告试验用于验证小分子的靶点。对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)、实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)或1型糖尿病的小鼠以25mg/kg浓度腹腔注射给药;空白组仅造模,不给药;空载组用等量溶剂腹腔给药。通过临床或组织学评分评价化合物的作用。Western blotting用于检测目的蛋白的表达量。伊文思蓝染色实验用于检测视网膜屏障的完整性。免疫荧光试验用于观察视网膜血管和Th17细胞的关系。结果:在130万个被测化合物中,用虚拟筛选选出15种候选化合物。通过体外试验筛选出CQMU151和CQMU152两种化合物。他们被发现在不影响Th1和Treg细胞分化的情况下抑制Th17细胞分化(两者P值都为0.001)。这些化合物在体内还降低了EAU的严重程度(P=0.01和0.013)。功能研究表明,它们降低了脾脏Th17细胞的比例和视网膜IL-17的表达,但没有降低Th1和Treg细胞的比例及其对应细胞因子IFN-γ和TGF-β的表达。进一步的研究表明,这些化合物通过IL-17>IL-6>STAT3的正反馈回路来降低p-STAT3的表达。这些化合物还通过上调紧密连接蛋白的表达,下调视网膜Th17的数量来减轻血视网膜屏障(BRB)受损情况。这些化合物也被发现可以降低EAE和1型糖尿病的严重程度。结论:1、CQMU151和CQMU152可以通过靶向RORγt在体外抑制Th17细胞的分化,并且不影响Th1和Treg细胞的分化。2、CQMU151和CQMU152可以在体内通过降低Th17细胞比例及IL-17的表达抑制EAU的发病,并且能维持BRB的完整性。3、CQMU151和CQMU152还可以抑制EAE和1型糖尿病。