胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,其致死率高居全球肿瘤相关致死率的第二位。中国是胃癌高发区,目前胃癌已成为中国第三大常见肿瘤,胃癌被发现时往往已经是晚期,且常伴随淋巴结转移、血行转移、腹腔种植性转移等,患者预后不良,五年生存率很低。因此,揭示胃癌的发生发展机制,寻找有效的药物靶点对于干预和阻断胃癌的发生发展具有重要的理论价值和临床意义。Reptin是AAA+ATP酶家族成员之一,具有多种生物学活性,如构成染色质重塑复合体、调节基因转录、参与DNA损伤修复和调节端粒酶活性等。研究发现,Reptin的异常表达与肿瘤形成密切相关。研究显示,Reptin在结直肠癌,肝细胞肝癌,膀胱癌,非小细胞肺癌,以及各种急慢性白血病中过度表达,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。然而,Reptin在胃癌发生发展中的作用尚不明确。本研究即初步探讨了Reptin在胃癌发生和进展过程中的作用。目的：通过研究Reptin在胃癌发生发展过程中的作用,探讨胃癌的发生机制,丰富我们对Reptin致癌机制的认识。方法：1.在组织水平上,用免疫组织化学染色的方法检测了40例胃癌及癌旁胃粘膜组织标本中Reptin的表达水平,并确定Reptin在胃癌及癌旁胃组织中表达的差异性。2.在胃癌细胞系BGC823和MGC803中转染Reptin siRNA和Control siRNA后,检测衰老相关的p-半乳糖苷酶(SA-β-Gal staining),观察细胞衰老情况。另一部分细胞提取总RNA和总蛋白,分别做QRT-PCR和Western blotting检测Reptin mRNA水平及蛋白水平的表达,验证干扰效果。3.在胃癌细胞系AGS,BGC823和HGC27中转染Reptin siRNA和Control siRNA后,从每种处理组中取300个细胞常规培养10天,观察细胞形成的克隆,染色并计数,比较细胞形成克隆的能力,评价Reptin对胃癌细胞克隆形成能力的作用。4.在胃癌细胞系BGC823和MGC803中转入Reptin siRNA和Control siRNA后,取5×104个细胞进行Transwell基质胶侵袭实验,穿过小室的细胞行结晶紫染色并镜下计数,分析Reptin对胃癌细胞体外侵袭能力的影响。5.在胃癌细胞系BGC823和MGC803中转染Reptin siRNA和Control siRNA后,分别提取细胞总RNA,和提取细胞蛋白,分别作RT-PCR、QRT-PCR及Western blotting检测Reptin对上皮-间质转化相关分子E-cadherin、Vimentin、和Snail表达的影响。6.将转染Reptin siRNA及Control siRNA的BGC823细胞分别皮下注入裸鼠体内,观察裸鼠皮下肿瘤的形成和生长情况。4周后麻醉处死裸鼠,分离肿瘤组织,冻于-80。C冰箱用于检测Reptin mRNA的表达。7.将转染Reptin siRNA及Control siRNA的BGC823细胞分别经尾静脉注入裸鼠体内,5周后麻醉处死裸鼠,解剖肺脏,清洗后电子天平称肺质量,并观察肺表面及实质内形成的转移灶情况。肺组织用中性福尔马林固定,常规石蜡切片,进行HE染色,以备组织病理学检查。结果：1.组织水平检测中,Reptin在胃癌组织中的表达明显高于正常胃粘膜组织中的表达。2. QRT-PCR和Western blotting显示,转染Reptin siRNA的人胃癌细胞BGC823和MGC803中Reptin mRNA和蛋白表达明显降低。衰老相关的β-半乳糖苷酶染色表明,在胃癌细胞系BGC823和MGC803中干扰Reptin表达后,细胞出现明显的衰老现象。3.克隆形成实验表明,在胃癌细胞系AGS,BGC823和HGC27中转入Reptin siRNA72小时后,细胞的克隆形成能力受到显著抑制。4. Transwell实验中,转染Reptin siRNA的人胃癌细胞BGC823和MGC803相比于对照组侵袭到下层的细胞数显著减少。5.将Reptin siRNA转染人胃癌细胞BGC823和MGC803后,]RT-PCR和QRT-PCR检测结果显示,干扰Reptin表达后,Vimentin及Snail的mRNA水平显著降低,E-cadherin则无明显变化。Western blotting检测显示E-cadherin的蛋白水平有所升高,Vimentin和Snail的蛋白水平显著降低。6.裸鼠皮下成瘤实验中干扰Reptin的BGC823细胞相对于对照细胞在裸鼠皮下形成肿瘤的能力明显降低,肿瘤的体积明显减小。QRT-PCR结果显示转染Reptin siRNA组裸鼠肿瘤组织中的Reptin mRNA水平明显降低。7.裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞实验中,干扰Reptin的BGC823细胞在裸鼠肺表面及实质内形成的转移灶明显少于对照组。HE染色镜下可见转染Reptin siRNA组瘤体较小；而对照组瘤体较大。结论：Reptin在胃癌组织中的表达明显高于其在癌旁胃粘膜组织中的表达。在胃癌细胞系中降低Reptin的表达可诱导细胞出现明显的衰老现象,显著抑制细胞的克隆形成能力和胃癌细胞的侵袭转移能力。并且抑制Reptin的表达显著降低了上皮-间质转化相关分子Vimentin和Snail mRNA及蛋白水平的表达,并能够明显升高上皮细胞标志分子E-cadherin的蛋白表达。以上在胃癌细胞系中进行的体外实验提示,Reptin能够通过影响以上生物学行为促进胃癌的发生发展。裸鼠成瘤实验及尾静脉转移瘤实验显示胃癌细胞系中降低Reptin表达后可显著抑制胃癌细胞在体内的成瘤能力及侵袭转移能力。本研究在组织水平、细胞水平及整体动物水平初步探讨了Reptin对胃癌发生发展的影响,为阐述胃癌的致病机制、开发新的药物治疗靶点提供了初步的理论依据。