论文部分内容阅读
中药复方是通过化学成分组合影响到信号分子组合,使紊乱的信号分子网络恢复平衡,从而达到治疗中医的证和相关疾病的作用和效果。课题以蛋白质组技术为依托,以基因芯片、RT-PCR和分子杂交等技术为补充建立了一套将化学成分组合与信号分子组合直接相关联的技术平台,考察了复方丹参方、有效单体和单体组合对AS细胞模型和临床病人血浆的影响,研究目的旨在通过研究初步揭示复方丹参方是哪几个成分通过哪几条途径对AS起治疗作用的。实验建立并完善了蛋白质组学技术平台,将DIGE技术与硝酸银和考马斯亮蓝染色的技术相比较发现三色荧光标记的双向电泳凝胶具有灵敏度高、准确度高,重复性好的特点。在三种蛋白质的检测方法中,硝酸银染色适合确定蛋白质点的有无,考马斯亮蓝R-250染色适合目标蛋白质为高丰度且样品量大的情况,DIGE技术适合用于差异蛋白质表达谱的分析。考察人参皂苷Rg1作用于INFα损伤的血管内皮细胞的基因和蛋白表达谱,发现复方丹参方中的人参皂苷Rg1可通过升高血管内皮细胞内NO的水平,抑制血管内皮细胞内黏附分子ICAM1,VCA2M1,E-selectin的表达,促进纤溶系统中PAI-1的产生,减少生长因子VEGF、bFGF、EGF、TGF-β1的产生等环节减轻TNFα对血管内皮细胞的损伤。复方丹参方及其单体组合可以抑制血管平滑肌细胞中G蛋白偶联受体、蛋白激酶C、钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶,进而减少基质金属蛋白酶MMP9的表达,同时通过减少氧化、炎症、基质降解相关蛋白的产生和促进细胞周期相关蛋白p53,p21的表达来减轻INFα对血管平滑肌细胞的损伤。血浆蛋白质组学的研究结果表明复方丹参方可以降低AS病人血浆中的纤维蛋白原和粒酶。以丹参酮Ⅱ A和人参皂苷Rg1单体来组方研究发现单体组方与复方丹参方在蛋白质表达图谱、差异基因的变化和体外凝血系统的影响方面具有相似性,而丹参酮Ⅱ A、人参皂苷Rg1与复方丹参方的蛋白质表达图谱差异较大,用单体来组方的研究结果更接近复方在一定条件下的作用结果。AS发生发展的机制为血管内皮细胞功能失调、大量平滑肌细胞增殖与迁移、纤溶减弱、炎症和氧化加强。复方丹参方是通过保护血管内皮细胞、抑制血管平滑肌细胞的增殖与迁移、调节纤溶和凝血系统而起到治疗AS作用的。