乳腺癌已成为当前社会的重要公共卫生问题,其发病率位居女性恶性肿瘤首位,是威胁女性身心健康的常见肿瘤之一。目前,常用于临床治疗乳腺癌的方法有手术切除、放疗和化疗等。但不论化疗还是放疗,其肿瘤靶向性低,在破坏癌细胞的同时,对正常组织也具有伤害性。新藤黄酸,作为一种广谱的抗癌药,可有效抑制乳腺癌细胞的增殖。叶酸受体在癌细胞表面高度特异性表达,可作为抗肿瘤药物的结合靶点。为了提高新藤黄酸的主动靶向性,增强抗肿瘤活性,降低毒副作用,本文构建了叶酸修饰载新藤黄酸纳米结构脂质载体,并对该制剂进行了理化表征和体内外药效评价,具体研究内容如下:1.载新藤黄酸的纳米结构脂质载体的制备及包封率测定的方法学建立本章实验以纳米材料作为载体,新藤黄酸作为模型药物,以乳化蒸发-低温固化法作为制备新藤黄酸纳米结构脂质载体的方法;同时,以聚乙二醇为桥梁,构建了叶酸靶向修饰新藤黄酸纳米结构脂质载体。得到的纳米制剂外观圆整,粒径(16.47±0.69)nm,电位(-4.66±8.97)m V,包封率为99.00%;同时建立GNA-NLC包封率的测定方法,该方法在线性范围内线性关系良好,方法重复性良好,制备的样品在24 h内稳定。2.叶酸修饰载新藤黄酸的纳米结构脂质载体的理化表征为了更好的储存纳米结构脂质载体,选择5%葡萄糖作为新藤黄酸纳米结构脂质载体的冻干保护剂,复溶后粒径较小,澄清透明。透射电镜图下可见制剂均呈圆球形,分散性好,形态圆整,大小分布均匀。差示扫描量热法和X-射线结果表明,GNA以无定型的状态被包裹于制剂中,而不是以晶体形式存在。溶血性实验说明该制剂具有较好的生物相容性和血液安全性。3.叶酸修饰的载新藤黄酸的纳米结构脂质载体的肿瘤细胞摄入研究本章实验以香豆素-6为荧光探针,制备成香豆素-6-NLC。利用高内涵成像系统,观察MDA-MB-231细胞和4T1细胞对3组纳米粒的荧光强度。通过荧光强度表明,纳米粒能够被细胞有效摄取,且新藤黄酸主要分布于细胞核;纳米粒经过叶酸修饰后,可以通过叶酸与叶酸受体特异性结合进入细胞,从而增加新藤黄酸在细胞内的蓄积,即增强了细胞对香豆素-6的摄入。4.叶酸修饰的载新藤黄酸的纳米结构脂质载体体外抑制作用研究本章实验以小鼠乳腺癌4T1细胞作为体外肿瘤模型,利用CCK-8法(Cell Counting Kit-8,细胞增殖/毒性检测试剂)检测不同浓度纳米粒的细胞毒性。细胞毒性结果显示,在新藤黄酸纳米结构脂质载体表面修饰叶酸后,叶酸与癌细胞上的叶酸受体特异性结合,新藤黄酸对癌细胞的靶向作用被增强,从而提高了新藤黄酸的体外抑制作用。5.叶酸修饰的载新藤黄酸的纳米结构脂质载体体内生物分布及体内抗肿瘤药效学研究本章实验构建了小鼠乳腺癌4T1细胞荷瘤裸鼠的模型,以Di R为荧光分子探针,利用小动物活体成像系统考察了Di R-Sol、Di R-NLC和FA-Di R-NLC在荷瘤裸鼠体内的生物分布情况;另外构建了小鼠乳腺癌4T1细胞小鼠的模型,通过尾静脉注射药物,比较了顺铂、GNA-Sol、GNA-NLC、FA-GNA-NLC在小鼠体内的抗肿瘤作用,以考察比较制剂经叶酸修饰前后的抗肿瘤效果。同时取小鼠心、肝、脾、肺、肾等主要脏器采用HE染色法进行组织病理学研究,以对主要脏器的损伤来评价制剂的安全性。