【摘 要】
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第一部分miR-223-3p通过调节NLRP3的表达降低高糖高脂诱导的糖尿病小鼠内皮细胞损伤【背景与目的】糖尿病患者的心血管疾病始于血管内皮细胞,体液中高血糖、高脂血症是血管内皮细胞损伤的主要原因。有证据表明糖尿病患者早期已经发生血管内皮细胞损伤,因此对糖尿病患者血管内皮细胞损伤的干预对患者具有重要意义。miR-223-3p也是近期心血管疾病研究的热点。炎症小体NL
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第一部分miR-223-3p通过调节NLRP3的表达降低高糖高脂诱导的糖尿病小鼠内皮细胞损伤【背景与目的】糖尿病患者的心血管疾病始于血管内皮细胞,体液中高血糖、高脂血症是血管内皮细胞损伤的主要原因。有证据表明糖尿病患者早期已经发生血管内皮细胞损伤,因此对糖尿病患者血管内皮细胞损伤的干预对患者具有重要意义。miR-223-3p也是近期心血管疾病研究的热点。炎症小体NLRP3激活与糖尿病相关的血管功能障碍和促炎表型有关。根据TargetScan的靶向预测,miR-223-3p和NLRP3具有靶向结合位点。为了证实miR-223-3p可以通过调节NLRP3的表达来抑制糖尿病患者心脏微血管内皮细胞损伤这一猜想,我们对糖尿病小鼠模型及心脏微血管内皮细胞进行了研究。探究miR-223-3p与NLRP3在高糖高脂诱导的糖尿病小鼠中的表达及对心脏微血管内皮细胞损伤的机制研究。【方法】1.实验分组:选取周龄为4周龄的30只C57BL/6J实验小鼠,随机分为对照组controlgroup(n=10)、模型组modelgroup(n=10)、miR-223-3p-mimics组(n=10),模型组采用高糖高脂饲料喂养建立糖尿病模型,另购买小鼠心脏微血管内皮细胞系(MCMECs)通过瞬时转染构建载体,共分为正常组normalgroup(正常环境下培养)、模型组modelgroup(不转染)、空白载体组blankcarriergroup(转染miR-NC)、miR-223-3p-mimics组和miR-223-3p-inhibitor组。2.采用targetscan对miR-223-3p与NLRP3的靶向关系进行预测,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-223-3p与NLRP3之间的关系。3.采用RT-qPCR法检测miR-223-3p与NLRP3在心脏组织和心脏微血管内皮细胞中的表达,采用Westernblot法检测NLRP3蛋白及凋亡相关蛋白Bax、caspase-3和Bcl2蛋白在心脏组织和心脏微血管内皮细胞中的表达,采AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞术检测MCMECs细胞的凋亡水平。4.数据统计分析:RT-qPCR、AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞术、Westernblot等实验均重复3次。采用SPSS23.0[Bizinsight(北京)信息技术有限公司]对数据进行统计分析。使用GraphPadPrism7(GraphPadSoftware,Inc.)绘制统计图。计量资料以均数±标准差(?x±s)表示,两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用LSD事后方差分析。以P
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