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目的:本课题旨在研究胰腺癌循环肿瘤细胞团的环状RNA(Circular RNA,circRNA)表达谱,并进一步探索循环肿瘤细胞团较单个循环肿瘤细胞差异性表达的circRNA对胰腺癌转移所产生的影响。方法:我们从15例晚期胰腺癌患者的外周血中分选并验证了循环肿瘤细胞团(Circulating tumor cell cluster,CTC-cluster)和循环肿瘤细胞(Circulating tumor cells,CTCs)的存在。按照 Qiagen RNeasy MinElute kit(Qiagen)的步骤从 CTC-cluster 及 CTCs中提取RNA。对纯化的RNA利用HeliScopeTM单分子测序装置(HelicosBioSciences.)进行RNA测序,得到CTC-cluster和CTCs的mRNAs和circRNAs序列集并使用生物统计学分析它们的差异性。同时,利用基因本体论项目(Gene Ontology project)即GO分析对CTC-cluster中上调基因的细胞组分作用进行分析。选取CTC-cluster中差异性表达最显著的20个circRNA,分别设计对应的shRNA对其进行敲除。将经过circRNA敲除的胰腺癌细胞株设为实验组,未行circRNA敲除的胰腺癌细胞株设为对照组,分别进行划痕实验进行对比,研究这20个circRNA对胰腺癌细胞转移能力的影响。进一步选取与胰腺癌转移相关的circRNA进行迁移和侵袭实验,探索其对胰腺癌细胞体外侵袭力的影响。利用TargetScan预测显著差异性表达的circRNA的靶miRNA,并分析与差异性mRNAs的相关性,使用Cytoscape软件制作circRNAs-miRNAs-mRNAs的三元关系网络图。结果:我们从获取的胰腺癌晚期患者的外周血中分选出了 CTC-cluster和CTCs,利用单分子测序得到了 CTC-cluster及CTCs的circRNA表达谱。通过GO分析发现,CTC-cluster较CTCs中差异性表达的基因可能与细胞的骨架成分相关,这可能是促进胰腺癌转移的因素之一。划痕实验证明,shcircRNA(hsa-circ-0075346)(P=0.01515)、shcircRNA(hsa-circ-0027491)(P=0.00021)、shcircRNA(hsa-circ-0006163)(P=0.03650)、shcircRNA(hsa-circ-0016599)(P=0.01247)、shcircRNA(hsa-circ-00005654)(P=0.04622)这五个实验组的胰腺癌细胞迁移能力受到了抑制,而实验组shcircRNA(hsa-circ-0008720(Customer))(P=0.03112)的胰腺癌细胞迁移能力增加了,且与未敲除对应circRNA的对照组相比,迁移率的T检验P值均小于0.05,具有统计学意义。进一步选取has-c irc-0075346进行慢病毒包装,利用Transwell实验证明,hsa-circ-0075346敲除后,胰腺癌细胞株BxPC-3和Capan-2的侵袭能力均受到了削弱(P<0.01)。利用Cytoscape做出了 circRNAs-miRNAs-mRNAs三元关系网络图。结论:实验表明,hsa-circ-0075346、hsa-circ-0027491、hsa-circ-0006163、hsa-circ-0016599、hsa-circ-0005654 与胰腺癌的转移呈正相关关系,hsa-circ-0008720(Customer)与胰腺癌的转移呈负相关关系。这六种circRNA可能参与了胰腺癌中CTC-cluster的形成,从而影响其稳定性。进一步选取hsa-circ-0075346进行侵袭实验证明,hsa-circ-0075346 与胰腺癌细胞的体外侵袭能力呈正相关关系。