目的1.研究Gai1/3是否参与了 HGF/MET所诱导的下游AKT-mTOR和ERK-MAPK信号通路的激活;2.初步探究Gαi1/3是否可以影响胰腺癌细胞的生物学功能。方法1.分别运用体外CRISPR/Cas9基因敲除系统和shRNA慢病毒转染法降低野生型(WT)小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)、人胰腺癌细胞Panc-1中Gαi1与Gαi3的表达水平;利用腺病毒转染法在Gαi1/3双敲型(DKO)的MEFs重新表达Gαi1/3或显性负突变(dominant-negative mutants)的 Gαi1/3,而在 WT-MEFs 中过表达Gαi1/3,建立相应的细胞模型;2.通过免疫蛋白印迹法(Westernblotting)检测上述细胞模型在HGF的刺激下,AKT-mTOR 和 ERK-MAPK 信号通路中的主要蛋 白 质及其磷酸化的水平;3.利用细胞克隆形成实验(Colony forming assay)检测HGF对Panc-1和Gαi1/3-shRNA Panc-1的细胞增殖能力的影响;4.分别通过划痕实验(Wound healing assay)、体外细胞迁移实验(In vitro cell migration assay)来检测HGF对Panc-1和Gai1/3-shRNAPanc-1的细胞迁移能力的影响;结果1.在MEFs中,敲除Gαi1/3能显著抑制HGF诱导的AKT-mTORC1与ERK信号的活化;2.在MEFs中,Gαi1与Gαi3分别被敲除后,HGF诱导的下游信号会被削弱,而Gαi1与Gαi3重新表达后会部分恢复下游信号的活化,而Gαi2敲除后HGF诱导的下游信号无显著变化;3.在MEFs中,敲低Gαi1/3能极大地限制HGF诱导的AKT-mTORC1与ERK信号的活化;4.在MEFs中,Gαi1/3的表达水平会显著影响着HGF诱导的Gab1的活化水平,进而影响下游AKT-mTORC1与ERK信号的活化水平,而Gαi2对Gab1的活化水平无显著影响;5.在Panc-1细胞中,通过shRNA慢病毒转染法敲低Gαi1/3后,HGF诱导的下游信号通路的活化水平显著降低,且HGF诱导的细胞增殖、迁移能力也明显下降。结论1.Gαi1/3是HGF介导的AKT-mTORC1与ERK信号通路的活化中的关键成员;2.Gab1位于Gai蛋白的下游,参与调节HGF诱导的AKT-mTORC1与ERK通路的活化;3.Gαi1/3的敲减显著抑制了 HGF诱导的人胰腺癌细胞Panc-1的增殖与迁移能力。