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目的
应用RNlA干扰(RNAi)技术分别研究重组质粒p、P抑制人肝癌细胞株HepG2内源CDK2、Cyclin E基因的表达及其对细胞周期进展的影响，探讨CDK2、Cyclin E作为抗肿瘤药物研发靶点的可行性。
方法
将重组质粒p、P及阴性对照P转染HepG2细胞，72小时后荧光显微镜下观察转染效率，并收获细胞，应用半定量RT-PCR检测CDK2及Cyelin E mRNlA的含量；应用流式细胞术测定细胞DNA含量，确定细胞周期进展；转染0h、8h、16h、24h、48h、72h分别细胞计数绘制细胞生长曲线；转染后0h、72h倒置显微镜下观察细胞形态。
结果
转染72h后，荧光显微镜观察绿色荧光达到60-70％，表明转染成功；RT-PCR检测结果表明与对照组相比CDK2 mRNA和Cyclin E mRNA拷贝数明显减少，差异有统计学意义，而阴性对照组与空白对照组无明显差异；流式细胞术结果显示p组G1期细胞比例由61.65±2.00％上升到78.12±1.78％，S期细胞比例由27.63±3.8％下降到16.07±2.84％(P<0.05)；P组Gl期细胞比例由61.65±2.00％上升到78.01±0.38％，S期细胞比例由27.63±3.8％下降到16.40±1.67％(P<0.05)，说明两组细胞均被阻滞到G1期；倒置显微镜观察转染72h后p、P转染组的细胞增殖明显减少，生长停滞，细胞数明显少于阴性及空白对照组；细胞计数绘制细胞生长曲线结果显示p、P转染组细胞明显生长缓慢，细胞数量少，阴性对照组与空白对照组无明显差异，结果与倒置显微镜下观察结果相符。
结论
应用RNAi技术可明显抑制CDK2和Cyclin E基因的表达，使其生物活性下降，对体外培养的HepG2细胞可产生显著的G1期阻滞，引起细胞周期延长，产生抗增殖作用。本实验将为CDK2和Cyclin E介导的肿瘤基因沉默疗法提供实验基础。