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背景：类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性系统性自身免疫疾病，其基本病理特征表现为滑膜炎、关节滑膜炎症细胞浸润、滑膜细胞异常增殖、血管翳形成以及关节软骨和骨损伤。有多种自身免疫抗体检测常用于RA的诊断，如类风湿因子(rheumatoid factor， RF)、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体(anti filaggrinautoantibody，AFA)、抗角蛋白抗体(anti keratin antibody，AKA)、抗细胞核周围因子(anti perinuclear factor，APF)、抗波型蛋白（anti vimentin autoantibody）抗体和抗环状瓜氨酸肽抗体(anti cyclic citrullinated peptide antibody，ACCP)。大多数RA自身免疫抗体B细胞决定簇都含有由精氨酸残基催化而成的瓜氨酸残基。虽然像聚丝蛋白、纤维蛋白和波型蛋白等瓜氨酸蛋白已经被证实参与了RA的自身免疫反应机制，但是，到目前为止，作为自身免疫抗原的瓜氨酸化蛋白还没有被系统性研究，可能还有其他的瓜氨酸化自身免疫抗原的存在。对此,本课题组前期研究通过二维免疫印迹方法（2D western blotting）对RA滑膜组织中的瓜氨酸化自身抗原进行了系统的筛选。结果发现，α1抗胰蛋白酶(Alpha-1-antitrypsin，A1AT)、动力蛋白重链3（dynein heavy chain3，DYH3）、纤维蛋白原Bβ链(fibrinogen beta chain，FIBB)、角蛋白84(keratin type II cuticular Hb4，KRT84)、角蛋白4（Cytokeratin4，KRT4）、基膜聚醣(lumican，LUM)、微管蛋白β链(tubulin beta chain，TUBB)和波型蛋白(vimentin，VIME)八种瓜氨酸化自身免疫抗原在RA滑膜中特异表达。但以上研究只是对RA中瓜氨酸化自身免疫抗原进行了初步筛选，筛选结果还有待于进一步的实验验证。目的：选取二维免疫印迹的方法筛选到的RA中瓜氨酸蛋白KRT84、KRT4、TUBB为研究对象，研究这三种蛋白在RA患者滑膜组织及滑膜液中的表达情况及表达水平，并进一步检测RA患者血液中是否有其对应的自身免疫抗体的表达及表达水平，从而证实RA中新的瓜氨酸化自身免疫抗原存在。方法：运用免疫组织化学方法定性分析RA滑膜组织中KRT84、KRT4、TUBB的表达情况，实验以骨关节炎（osteoarthritis，OA）滑膜作为对照组；通过蛋白免疫印迹定量分析KRT84、KRT4、TUBB、在RA滑膜及OA对照中的表达差异；通过酶联免疫吸附实验定量分析KRT84、KRT4、TUBB在RA滑膜液及OA对照中的表达差异；通过酶联免疫吸附实验检测KRT84、KRT4、TUBB在RA血液中可能存在的自身免疫抗体的表达水平。统计多组比较采用单因素的方差分析（one-way ANOVA），两两比较采用LSD检验。结果：通过免疫组织化学法发现，KRT84、TUBB在RA滑膜中有明显表达，在OA滑膜中无表达或很低表达，KRT4在RA滑膜和OA滑膜中均无表达。蛋白免疫印迹定量分析显示，KRT84、TUBB在RA中表达水平显著高于OA中的表达水平（P=0.030，P=0.041及P=0.013）；KRT4在RA中和OA中无明显表达。酶联免疫吸附法结果显示，与对照组样本的平均水平比较，KRT84在RA的滑液中的表达显著高于其在OA中的表达（p=0.0031）；KRT4和TUBB的在RA和OA滑液中的表达水平均低，且无显著性差异。与健康对照相比，抗KRT84自我免疫抗体在RA的血清中具有显著性高表达(p=0.00025)。虽然抗TUBB、抗KRT4的自身免疫抗体在RA和对照组中表达水平相比无显著性变化，但是三分之一的RA血清样本中抗TUBB抗体的表达水平相对升高。结论：KRT84在RA的滑膜和滑液中均有明显的高表达，血液中存在KRT84自身免疫抗体的表达，显示KRT84为RA中新的自身免疫抗原。建议KRT84被瓜氨酸化后，通过刺激机体产生自身免疫抗体，激活免疫应答参与了RA疾病的发展。三分之一的RA血清样本中抗TUBB抗体的表达水平相对升高，建议TUBB可与RA的自身免疫相关。目的：本研究通过蛋白质组学的方法比较类风湿性关节炎（RA）、骨性关节炎（OA）及强直性脊柱炎（AS）滑膜组织中表达的蛋白，筛选RA滑膜中表达特异性下调的蛋白，并通过SNP分析方法分析该靶蛋白编码基因对RA的遗传易感性。方法：提取RA(10例)、OA(10例)及AS(10例)滑膜组织总蛋白，每类疾病的样本等比例混合（pooling方法），然后用2D-凝胶电泳进行分析，对RA的样本中表达量明显低于OA和AS的蛋白进行飞行时间质谱鉴定，检测结果用蛋白免疫印迹方法验证。用Taqman方法对中国人群中267例RA患者和160个健康对照的VDBP（维生素D结合蛋白）编码基因的tag SNPs进行基因分型研究，并扩大样本量验证结果（389例RA和371健康对照）。结果：蛋白质组学研究发现，在RA患者滑膜中VDBP表达量明显下降，Westernblotting实验也验证了这一结果。通过基因分型研究发现，SNP位点rs2282679与RA密切相关（P=0.026794）。进一步扩大样本实验也得出了一致结果。 rs2282679与RA存在显著相关性(OR=0.678639,95%CI=[0.541113~0.851118]，P=0.000776)。结论：有报道1,25-二羟基维生素D3通过与VDBP结合，能够抑制细胞增殖，减少免疫球蛋白的产生和细胞因子的释放。 VDBP还可以通过激活破骨细胞介导骨吸收。VDBP在RA中表达的下调及其基因的遗传效应建议维生素D参与RA病理过程的途径。