论文部分内容阅读
研究背景:鼻咽癌是一种来源于鼻咽部的恶性肿瘤,好发于我国的南方以及东南亚地区。目前认为鼻咽癌的病因是EB病毒、基因以及环境因素的相互作用,其发病是多步骤且复杂的过程。根据WHO的病理分型,鼻咽癌主要分为:非角化癌、角化型鳞状细胞癌以及基底样鳞状细胞癌。鼻咽癌具有早期淋巴转移的特点。对于无远处转移的鼻咽癌,主要采取以放射治疗为主的综合治疗手段。远处转移是目前鼻咽癌治疗失败的主要原因。探索鼻咽癌转移的机制,寻找可靠的抑制肿瘤转移的靶点,是目前鼻咽癌转化医学研究的热点之一。在前期研究中,本课题组发现鼻咽癌细胞中存在脂肪滴堆积现象,提示鼻咽癌细胞中的脂肪酸代谢可能存在异常,并参与鼻咽癌的发生与发展。脂肪酸代谢改变与肿瘤的关系尚未阐明。目前鼻咽癌脂肪酸代谢及其相关基因改变的文献报道非常有限。目的:筛选出鼻咽癌中异常表达的脂肪酸代谢相关基因并进一步研究其对鼻咽癌恶性生物行为的影响极其可能的分子机制。研究方法:1.通过对NCBI下属的GEO数据库中两组鼻咽癌表达谱芯片数据进行生物信息学分析,筛选出鼻咽癌中与脂肪酸代谢相关的差异基因。2.利用TCGA数据库,分析ACAA1基因在人类多种肿瘤中的表达改变。3.通过荧光定量PCR、Western blot法及免疫组织化学染色法验证ACAA1在鼻咽癌中的转录和表达情况。4.构建稳定过表达ACAA1的鼻咽癌细胞系,通过绘制生长曲线、克隆形成实验、细胞迁移试验以及体外细胞侵袭实验来检测ACAA1基因在鼻咽癌细胞中的肿瘤生物学功能。5..利用Western blot方法检测PTEN、Akt/pAkt以及上皮-间质转化相关因子Snail、MMP9、MMP2、E-cadherin的表达情况,并进一步利用PTEN抑制剂phen处理过表达ACAA1的鼻咽癌细胞,检测ACAA1是否通过PTEN/Akt信号传导通路影响鼻咽癌细胞的转移。研究结果:1.发现脂肪酸代谢相关基因ACAA1在鼻咽癌和10种肿瘤中低表达生物信息学分析发现脂肪酸代谢相关基因ACAA1在鼻咽癌和头颈部鳞状细胞癌、肺癌、肝癌等10种恶性中低表达;进一步通过实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色法验证了ACAA 在鼻咽癌中转录和表达的下调,进一步验证了生物信息学分析结果的可靠性。2.ACAA 抑制鼻咽癌细胞的恶性生物学行为ACAA1可抑制鼻咽癌细胞的增殖、克隆形成、细胞迁移以及侵袭能力。提示ACAA1抑制鼻咽癌细胞的恶性生物学行为3.ACAA 抑制鼻咽癌细胞的上皮间-质转化转染ACAA1基因的鼻咽癌上皮细胞中Snail、MMP9、MMP2表达下调,而E-cadherin表达上调,提示ACAA1抑制鼻咽癌细胞的上皮间-质转化。4.ACAA 通过PTEN/Akt/EMT途径抑制鼻咽癌细胞的转移过表达ACAA1的鼻咽癌细胞中PTEN表达增高,而且Akt的磷酸化水平下降;PTEN抑制剂phen处理可促进过表达ACAA1鼻咽癌细胞的Akt磷酸化水平并促进细胞迁移能力。说明ACAA1通过PTEN/Akt/EMT途径抑制鼻咽癌细胞的转移。研究结论:1.ACAA1在鼻咽癌中转录和表达下调;2.过表达ACAA1基因可抑制鼻咽癌细胞的恶性生物学行为;3.ACAA 抑制鼻咽癌细胞的上皮间-质转化,并通过PTEN/Akt/EMT通路抑制鼻咽癌的转移。综上提示,ACAA1基因可能是一个鼻咽癌候选的抑癌基因。